[发明专利]一种新疆海岛棉毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法及棉花品种鉴定方法

说明书

本发明提供了一种新疆海岛棉毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法及棉花品种鉴定方法，属于植物品种鉴定技术领域。本发明基于毛细管电泳对新疆已审定的海岛棉品种进行了SSR标记的筛选，其中毛细管电泳不需要经过染色、显影等复杂过程进行样品基因型分析，节省时间和利于大样本处理，便于品种真实性及纯度检测上的应用；毛细管电泳检测方法，依据待检品种目标峰的位置，与同一毛细管泳道的内标比较，通过荧光线直接读出目标DNA特异目标条带大小，精确到1bp。

技术领域

本发明涉及植物品种鉴定技术领域，尤其涉及一种新疆海岛棉毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法及棉花品种鉴定方法。

背景技术

海岛棉是世界上最优良的棉纤维，1786年于乔治亚圣西门岛(Saint SimonIsland)栽种成功，因此将其命名为“海岛棉”。海岛棉的优良特性是其纤维非常细长，强度也特别高，是纺织纤维的上上品。以海岛棉织造的衣服有极佳的触感及良好的透气性与吸汗力，更由于海岛棉富有光泽及对染料的高亲和力，使得衣物色彩亮丽鲜明，亦绝非其它棉织衣物所能比拟。

海岛棉种子资源是新疆海岛棉生产最重要的生产资料之一，而优良品种是海岛棉高产和稳产的基础，品种混杂和纯度降低会明显降低海岛棉花的产量和品质。因此，海岛棉品种真实性和纯度的鉴定对于海岛棉育种至关重要。

常用的农作物品种鉴定方法主要有形态学鉴定法、物理化学鉴定法、生化鉴定法和DNA分子标记指纹图谱鉴定法。由于分子生物学技术的发展，利用分子标记技术构建作物品种DNA指纹图谱具有快速简便、检测准确的优点，已成为品种间鉴别、种子纯度检测的重要技术工具。如于1991年创立的微卫星DNA或短串联重复(STR)，是一种真核生物基因组中普遍存在的重复序列，重复序列一般由1～6个碱基组成，重复次数在不同物种或同一物种不同基因型之间是高度可变的。这些重复序列两端大多是保守的单拷贝序列，因此可以根据保守序列设计特异引物，通过PCR技术将中间的核心重复序列扩增出来，利用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳分析技术可获得其长度多态性。

但是，利用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳分析技术获得长度多态性存在不足之处，例如，不能检测出特异性目标条带大小，难以满足多批次棉花品种的鉴定与比较。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新疆海岛棉毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法及棉花品种鉴定方法，本发明的方法用于大样本处理，处理精度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种新疆海岛棉毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

从已知的定位在染色体上的棉花SSR引物中筛选在不同棉种间有多态性的引物，作为核心引物；

利用所述核心引物对新疆已审定海岛棉品种进行PCR扩增，得到扩增产物；

对所述扩增产物进行毛细管电泳，得到新疆海岛棉毛细管电泳DNA指纹图谱。