[发明专利]一种高产纤维二糖酶菌株及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种启动子PpgdA基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种纤维二糖酶编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种重组质粒pGPDA-hph，其特征在于，所述重组质粒pGPDA-hph是将权利要求1所述的启动子PpgdA基因连接到PGPD-hph质粒上获得的。

4.一种重组质粒pGPDA-hph-CB，其特征在于，所述重组质粒pGPDA-hph-CB是将权利要求2所述的纤维二糖酶编码基因连接到权利要求3所述的重组质粒pGPDA-hph上获得的。

5.一种pPK2-CB重组质粒，其特征在于，所述pPK2-CB重组质粒是将pPK2质粒用HindⅢ酶切，然后去磷酸化，得到的线性化pPK2质粒与来自pGPDA-hph-CB质粒的包含启动子PpgdA基因、hph潮霉素基因及CB基因的组合元件进行连接获得的，其中hph潮霉素基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根据权利要求5所述的一种pPK2-CB重组质粒，其特征在于，所述启动子PpgdA基因、hph潮霉素基因及CB基因的组合元件通过以下方法获得：

以重组质粒pGPDA-hph-CB为模版，设计引物，扩增得到所述启动子PpgdA基因、hph潮霉素基因及CB基因的组合元件，其中，

上游引物：

pPK2-GPDA-F：5’-catctccactcgacctgcaggcatgcaagctttgtgacgaactcgtgagctc-3’

下游引物：

GPDA-CB-R：5’-gacgttgtaaaacgacggccagtgccaagctttcagactctattgggatacc-3’。

7.一种农杆菌菌株，其特征在于，所述农杆菌菌株是将权利要求5所述的pPK2-CB重组质粒转化到农杆菌中而获得的新菌株。

8.一种高产纤维二糖酶菌株，其特征在于，为将权利要求2所述纤维二糖酶编码基因整合到里氏木霉以后所得的一种新的里氏木霉。

9.如权利要求8所述的高产纤维二糖酶菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、将权利要求1所述的启动子PpgdA基因和权利要求2所述的纤维二糖酶编码基因构成一个表达元件整合到PGPD-hph载体上；

2)、将权利要求1所述的启动子PpgdA基因、权利要求2所述的纤维二糖酶编码基因和hph潮霉素基因的组合元件整合到pPK2载体上；

3)、利用根癌农杆菌介导里氏木霉转化并获得高产纤维二糖酶的里氏木霉工程菌株，即所述高产纤维二糖酶菌株。

10.如权利要求8所述的高产纤维二糖酶菌株的应用，其特征在于，利用高产纤维二糖酶菌株水解纤维素。