[发明专利]一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体及其制备方法、免疫检测试剂、应用

说明书

本发明属于单克隆抗体领域，具体涉及一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体及其制备方法、免疫检测试剂、应用。该单克隆抗体包含氨基酸序列如SEQ ID NO:1‑3所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4‑6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。本发明为评估淋巴瘤或淋巴结反应性增生提供诊断试剂，该诊断试剂可替代进口试剂，实现该类诊断试剂的国产化，大幅降低诊断成本。在试剂应用方面，该抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体与国际上广泛使用的L1C1单抗相比，特异性评价一致，抗体的使用浓度更低，在0.05μg/mL即可达到较强的染色效果与较佳的背景。

技术领域

本发明属于单克隆抗体领域，具体涉及一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体及其制备方法、免疫检测试剂、应用。

背景技术

抗体轻链分子量约为25kD，由约214个氨基酸残基构成。轻链分为κ链和λ链，据此可将Ab分为两型，即κ型和λ型。一个天然Ab分子上两条轻链的型别总是相同的，但同一个体内可存在分别带有κ或λ链的抗体分子。

五类Ab(IgM、IgG、IgA、IgD、IgE)中每类Ab的轻链都可以有κ链或λ链，两型轻链的功能无差异。不同种属生物体内两型轻链的比例不同，正常人血清免疫球蛋白κ：λ约为2:1，而在小鼠则为20:1。κ：λ比例的异常可能反映免疫系统的异常。

免疫球蛋白κ轻链的识别可用于淋巴瘤和淋巴结反应性增生的鉴别诊断。目前国际上广泛使用的抗人免疫球蛋白κ轻链单克隆抗体的克隆号为L1C1，该进口试剂的价格昂贵，直接导致了该类病理诊断的诊断成本居高不下。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体，与进口试剂L1C1相比，特异性评价一致，且在较低抗体浓度下能够达到更强的染色，显示出更好的亲和力。

本发明的第二个目的是提供上述抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的制备方法。

本发明的第三个目的是提供含有上述抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的免疫检测试剂。

本发明的第四个目的是提供上述单克隆抗体、免疫检测试剂在免疫组化方面的应用。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO:1-3所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4-6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。

本发明的抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体，为评估淋巴瘤或淋巴结反应性增生提供诊断试剂，该诊断试剂可替代进口试剂，实现该类诊断试剂的国产化，大幅降低诊断成本。在试剂应用方面，该抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体与国际上广泛使用的L1C1单抗相比，特异性评价一致，抗体的使用浓度更低，在0.05μg/mL即可达到较强的染色效果与较佳的背景。

优选地，所述抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体包含氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示的轻链可变区。重、轻链可变区采用上述序列，能够进一步保证其应用效果。

一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)使用免疫球蛋白κ轻链免疫原免疫兔子，采集兔外周血，收集兔外周血单个核细胞，分离出抗原特异性B淋巴细胞；

(2)针对步骤(1)得到的抗原特异性B淋巴细胞，经过培养鉴定筛选出阳性细胞孔，进而获取抗体重链、轻链基因，扩增抗体重链、轻链目的基因，经重组、表达获得兔源单克隆抗体。