[发明专利]一种外泌体富集磁珠材料的制备方法与应用

权利要求书

1.一种外泌体富集磁珠材料的制备方法，其特征在于，所述外泌体富集磁珠材料的制备方法包括以下步骤：

1)制备两亲性超分子复合物修饰的纳米磁珠；

2)将两亲性超分子修饰磁珠与体液中外泌体特异性结合进行捕获。

2.根据权利要求1所述的外泌体富集磁珠材料的制备方法，其特征在于，所述修饰磁珠的制备包括如下步骤：

1)乙二醇作为反应溶剂，加入无水乙酸钠，聚乙二醇和六水合氯化铁于40℃反应30min，转移至高压釜中200℃反应16h，反应完成后，将得到的黑色沉淀物进行洗涤后干燥；

2)Fe₃O₄@SiO₂分散于80％的乙醇中，超声30min分散材料，加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷，70℃反应20h，反应完成后将得到的黑色沉淀洗涤，60℃真空干燥；

3)Fe₃O₄@SiO₂-NH₂分散在反应溶液中，其反应溶液的配比为乙酸：甲醇＝1:125，加入戊二醛和氰基硼氢化钠，在40℃反应10h，所得黑色沉淀用反应缓冲液进行洗涤；

4)将材料磁分离收集并直接分散于反应缓冲液中，向溶液中加入树枝状聚合物和氰基硼氢化钠，40℃反应10h，对沉淀物洗涤后，黑色固体为Fe₃O₄@SiO₂-NH₂-Dendrimer并在60℃的环境中干燥过夜；

5)称取AMB分子溶解于二甲基亚砜中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶解于MES，0.1M缓冲液中；

6)混合步骤4)和步骤5)中所得到的溶液，37℃活化20min，将活化好的AMB溶液与Fe₃O₄@SiO₂-NH₂-Dendrimer混合，室温反应过夜，反应完成之后使用MES缓冲液洗后在60℃的环境中干燥。

3.根据权利要求1所述的外泌体富集磁珠材料的制备方法，其特征在于，所述纳米磁珠的官能团包括两亲性分子。

4.根据权利要求3所述的外泌体富集磁珠材料的制备方法，其特征在于，所述两亲性分子插入至脂质膜中，与脂质膜中的固醇分子发生分子间相互作用力而结合；

所述两亲性超分子复合物修饰到磁性微球上用于外泌体的捕获；

所述纳米磁珠与外泌体脂质膜发生结合作用。

5.根据权利要求1所述的外泌体富集磁珠材料的制备方法，其特征在于，所述树枝状聚合物与两亲性分子偶联后为两亲性分子提供作用位点。

6.根据权利要求1所述的外泌体富集磁珠材料的制备方法，其特征在于，步骤2)中得到的捕获纳米磁珠与体液进行混合，捕获外泌体。

7.根据权利要求4所述的外泌体富集磁珠材料的制备方法，其特征在于，所述两亲性分子用二甲基亚砜进行超声溶解后，在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的作用下与具有游离氨基的树枝状聚合物分子进行偶联。

8.根据权利要求6所述的外泌体富集磁珠材料的制备方法，其特征在于，捕获纳米磁珠与样品液的孵育时间为30min；

捕获纳米磁珠和捕获外泌体后进行原位裂解。

9.一种如权利要求1-8任一所述的外泌体富集磁珠材料在捕获外泌体中的应用。