[发明专利]一种hiPSC中外源基因残留检测用特异性DNA片段、引物、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种用于检测hiPSC中外源基因残留的特异性DNA片段，其特征在于，所述特异性DNA片段来源于制备hiPSC时所用的游离型载体。

2.根据权利要求1所述特异性DNA片段，其特征在于，所述游离型载体包括以下一种或几种游离型载体：基于OriP/EBNA1、S/MAR、SV40、BKV、BPV-1中的一个或几个的游离型载体。

3.根据权利要求2所述特异性DNA片段，其特征在于，当所述游离型载体为基于OriP/EBNA1的游离型载体时，所述特异性DNA片段选自以下序列中至少一种：

A.截取SV40 polyA信号区全长70bp以上的截短DNA序列；

B.截取OriP序列片段区全长70bp以上的截短DNA序列；

C.截取EBNA1序列片段区全长70bp以上的截短DNA序列；

D.截取质粒上细菌来源DNA片段区全长70bp以上的截短DNA序列；

优选的，所述SV40 polyA信号区包括以下至少一种DNA片段：

1)核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA片段；

2)与SEQ ID NO:1互补的DNA片段；

3)在SEQ ID NO:1的基础上经过添加、缺失、插入一个或多个核苷酸序列形成的DNA片段；

优选的，所述EBNA1序列片段区包括以下至少一种DNA片段：

1)核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的DNA片段；

2)与SEQ ID NO:2互补的DNA片段；

3)在SEQ ID NO:2的基础上经过添加、缺失、插入一个或多个核苷酸序列形成的DNA片段；

优选的，所述OriP序列片段区包括以下至少一种DNA片段：

A.核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的DNA片段；

B.与SEQ ID NO：3互补的DNA片段；

C.在SEQ ID NO：3的基础上经过添加、缺失、插入一个或多个核苷酸序列形成的DNA片段；

优选的，质粒上细菌来源DNA片段区包括以下至少一种DNA片段：

1)核苷酸序列如SEQ ID NO:27所示的DNA片段；

2)与SEQ ID NO:27互补的DNA片段；

3)在SEQ ID NO:27的基础上经过添加、缺失、插入一个或多个核苷酸序列形成的DNA片段；

优选的，所述特异性DNA片段包括以下一种或几种DNA片段：EBNA1截短片段、OriP截短片段、SV40截短片段和质粒上细菌来源DNA截短片段；

优选的，所述EBNA1截短片段包括核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示的EBNA1-1、核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示的EBNA1-2和/或核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示的EBNA1-3；

所述OriP截短片段包括核苷酸序列如SEQ ID NO:21所示的OriP-1、核苷酸序列如SEQID NO:22所示的OriP-2和核苷酸序列如SEQ ID NO:23所示的OriP-3；

所述SV40截短片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:24所示。