[发明专利]一种rhG-CSF的发酵培养基及其发酵方法

权利要求书

1.一种生产rhG-CSF的基础培养基，其特征在于，所述基础培养基中包含如下所示的组分：碳源、酵母提取物、胰蛋白胨、十二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化铵、氯化钠、硫酸亚铁、硫酸镁和消泡剂。

2.根据权利要求1所述的基础培养基，其特征在于，所述碳源为山梨醇或甘露醇中的一种或组合。

3.根据权利要求1所述的基础培养基，其特征在于，所述基础培养基中包含如下所示的组分：

其中，碳源浓度为200-600g/L，碳源需要单独配制。

4.一种用于生产rhG-CSF的发酵方法，其特征在于，具体技术方案如下：

I.将工程菌菌种在种子培养基中逐级放大，获得种子液；

II.将种子液接种至权利要求1所述基础培养基中进行高密度培养，流加碳源，分批次流加补料培养基至培养结束。

5.根据权利要求4所述的发酵方法，其特征在于，所述工程菌菌种为p^ET-G-CSF/BL₂₁(DE₃)PlysS。

6.根据权利要求4所述的发酵方法，其特征在于，流加碳源是在步骤II开始培养2-4h后流加至发酵体系中，并控制2-4h流加完毕。

7.根据权利要求4所述的发酵方法，其特征在于，所述分批次流加补料培养基为分两次流加补料培养基，第一次流加补料培养基是指发酵体系溶氧和pH同步上升时流加补料培养基1；第二次流加补料培养基是指加入诱导剂后流加补料培养基2。

8.根据权利要求7所述的发酵方法，其特征在于，所述补料培养基1包含如下所示的组分：山梨醇或甘露醇400-600g/L，酵母提取物35-55g/L，胰蛋白胨45-75g/L，硫酸镁0.5-3g/L；补料培养基2包含如下所示的组分：山梨醇或甘露醇200-300g/L，乳糖200-300g/L，胰蛋白胨45-75g/L，硫酸镁0.5-3g/L。

9.根据权利要求7所述的发酵方法，其特征在于，第一次补料结束后，当发酵液的OD600值增长至30-40时，加入诱导剂进行诱导培养，所述诱导剂为IPTG和乳糖中的一种或组合。

10.根据权利要求4所述的发酵方法，其特征在于，所述的高密度培养过程中控制发酵液溶氧量不低于30％，发酵温度为32-37℃，pH为6.8±0.2。