[发明专利]一种血浆中抗-DCDC2抗体的检测方法

说明书

本发明提出了一种血浆中抗‑DCDC2抗体的检测方法，包括以下步骤：(1)包被液稀释人DCDC2重组蛋白，得到重组蛋白稀释液，加入酶标板中，低温过夜，进行抗原包被；(2)用PBST缓冲液清洗酶标板，再加入封闭剂，室温封闭；(3)再用PBST缓冲液清洗酶标板，加入待测血浆，室温孵育；(4)再用PBST缓冲液清洗酶标板，加入辣根过氧化物酶标记山羊抗人IgG，室温孵育；(5)再用PBST缓冲液清洗酶标板，加入TMB显色液，孵育后加入TMB显色终止液，用酶标仪于450nm下测定吸光度。本发明的方法，通过对血浆中抗‑DCDC2抗体的检测，提高胆管癌诊断的准确性和可靠性，提供了胆管癌诊断特异性和敏感度更优的方法。

技术领域

本发明涉及G01N33/574技术领域，具体涉及一种血浆中抗-DCDC2抗体的检测方法。

背景技术

胆管癌是一类起源于胆管系统衬覆上皮细胞的恶性肿瘤，在肝胆恶性肿瘤的发病率中仅次于肝癌，且呈现逐年上升趋势。胆管癌隐匿性强，发病症位位于肝脏内，在临床方面有某些症状类似于肝癌，因此，胆管癌确诊时往往已处于中晚期，患者获得根治性治疗、患者的存活率大大下降。目前，胆管癌的诊断主要依靠临床表现、影像学、实验室及病理学检查。然而胆管癌早期患者无明显临床症状，且只有少数的患者在胆管癌早期时幸运的通过体检意外发现。这对于胆管癌的诊治、提高患者生存率都有明显的负面影响。随着医学设备和医学技术的进步和广泛应用，胆管癌的诊断率得到了一定提高，但是在早期微小病灶的显像上仍有不足。

肿瘤标志物的检测是肿瘤诊断的和评估的主要方法，而酶联免疫吸附剂测定又是常用的肿瘤标志物的检测方法。中国专利CN107271661A公开了一种肝癌早期检测试剂盒的制备方法，运用酶联免疫吸附剂测定的原理制备得到了肝癌早期检测试剂盒。但是该试剂盒具有检测特异性和针对性。目前胆管癌相关肿瘤标志物中研究最多的是CA19-9、CA242、CEA、CA125、CA211和AFP等，但是这些相关肿瘤标志物缺乏对胆管癌诊断的特异度和敏感度。基于此，本发明提出了一种血浆中抗-DCDC2抗体的检测方法，通过对血浆中抗-DCDC2抗体的检测，提高胆管癌早期诊断的准确性和可靠性。

发明内容

本发明提出了一种血浆中抗-DCDC2抗体的检测方法，包括以下步骤：

(1)抗原包被：包被液稀释人DCDC2重组蛋白，得到重组蛋白稀释液，加入酶标板中，低温过夜，进行抗原包被；

(2)用PBST缓冲液清洗酶标板，再加入封闭剂，室温封闭；

(3)再用PBST缓冲液清洗酶标板，加入待测血浆，室温孵育；

(4)再用PBST缓冲液清洗酶标板，加入辣根过氧化物酶标记山羊抗人IgG，室温孵育；

(5)再用PBST缓冲液清洗酶标板，加入TMB显色液，孵育后加入TMB显色终止液，用酶标仪于450nm下测定吸光度。

在一种优选的实施方式中，包括以下步骤：

(1)抗原包被：包被液稀释人DCDC2重组蛋白，得到重组蛋白稀释液，加入酶标板中，低温过夜，进行抗原包被；

(2)用PBST缓冲液清洗酶标板，清洗三次，每次静置2min，再加入封闭剂，室温封闭；

(3)再用PBST缓冲液清洗酶标板,清洗三次，每次静置2min，加入待测血浆，室温孵育；

(4)再用PBST缓冲液清洗酶标板，清洗五次，每次静置2min，加入辣根过氧化物酶标记山羊抗人IgG，室温孵育；

(5)再用PBST缓冲液清洗酶标板，清洗三次，每次静置2min，加入TMB显色液，孵育后加入TMB显色终止液，用酶标仪于450nm下测定吸光度。