[发明专利]悬浮细胞孵育染色方法及免疫荧光检测方法

权利要求书

1.一种悬浮细胞孵育染色方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，固定：

采用多聚甲醛对悬浮细胞进行固定，采用PBS缓冲液清洗；

S2，一抗孵育：

采用山羊血清稀释一抗，加入到步骤S1离心清洗好的悬浮细胞中，吹打使细胞重悬，置于37℃恒温摇床中孵育0.5～1.5h，离心沉淀，弃上清，采用PBS缓冲液清洗沉淀细胞；

S3，二抗孵育：

采用PBS缓冲液稀释荧光二抗，加入并使步骤S2离心清洗后的沉淀细胞重悬，37℃恒温摇床中孵育0.5～1.5h，离心沉淀，弃上清，采用PBS缓冲液清洗沉淀细胞；

S4，DAPI染核：

向步骤S3离心清洗后的沉淀细胞中加入DAPI染液，吹打使沉淀细胞重悬，常温避光孵育4～10min，离心沉淀细胞，弃上清，采用PBS缓冲液清洗沉淀细胞；

S5，封片：

向步骤S4中离心清洗后的沉淀细胞中加入PBS缓冲液，吹打使沉淀细胞重悬均匀，得细胞悬液；

在载玻片上滴加抗荧光封片剂，再滴加细胞悬液至抗荧光封片剂中，盖上盖玻片，避光静置晾干，得待检样品。

2.根据权利要求1所述的悬浮细胞孵育染色方法，其特征在于，所述山羊血清的含量为10％。

3.根据权利要求1所述的悬浮细胞孵育染色方法，其特征在于，步骤S2和步骤S3中，37℃恒温摇床中孵育1h。

4.根据权利要求1所述的悬浮细胞孵育染色方法，其特征在于，每个步骤中，采用PBS缓冲液清洗的次数为3～4次。

5.根据权利要求1所述的悬浮细胞孵育染色方法，其特征在于，在步骤S4中细胞悬液的体积为80～120μL，在载玻片上滴加30μL抗荧光封片剂，再滴加30μL细胞悬液至抗荧光封片剂中。

6.根据权利要求1至5任一项所述的悬浮细胞孵育染色方法，其特征在于，所述悬浮细胞选自NR8383、U266、大鼠神经干细胞。

7.根据权利要求1至5任一项所述的悬浮细胞孵育染色方法，每个步骤中，离心的转速均为1500r/min，时间3min。

8.一种悬浮细胞免疫荧光检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

按照权利要求1至7任一项所述的悬浮细胞孵育染色方法制备待检样品；

镜检。