[发明专利]悬浮细胞孵育染色方法及免疫荧光检测方法

说明书

本发明提供一种悬浮细胞孵育染色方法及荧光检测方法，该孵育染色方法包括如下步骤：S1，固定；S2，一抗孵育；S3，二抗孵育；S4，DAPI染核；S5，封片，得待检样品。该孵育染色方法的整染色流程不需要涂片、风干、细胞通透等步骤，试验时间缩短，效率高，提高荧光信噪比，且能够保持甚至提升曝光效果。

技术领域

本发明涉及悬浮细胞检测技术领域，具体涉及一种悬浮细胞孵育染色方法及免疫荧光检测方法。

背景技术

悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮生长状态的细胞。

常规悬浮细胞免疫荧光的染色方法流程顺序为：固定，清洗，涂片，风干或者烘干，再次清洗，通透，清洗，加封闭液，加一抗，清洗，加二抗，清洗，加DAPI，清洗，封片晾干。整个悬浮细胞的染色流程需要涂片、风干、细胞通透等步骤，试验时间长，效率低。

发明内容

基于此，有必要提供一种悬浮细胞孵育染色方法及免疫荧光检测方法，不仅能够缩短试验时间，还能够提升悬浮细胞的荧光检测效果。

本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种悬浮细胞孵育染色方法，包括如下步骤：

S1，固定：采用多聚甲醛对悬浮细胞进行固定，采用PBS缓冲液清洗。

S2，一抗孵育：采用山羊血清稀释一抗，加入到步骤S1离心清洗好的悬浮细胞中，吹打使细胞重悬，置于37℃恒温摇床中孵育0.5～1.5h，离心沉淀，弃上清，采用PBS缓冲液清洗沉淀细胞。

S3，二抗孵育：采用PBS缓冲液稀释荧光二抗，加入并使步骤S2离心清洗后的沉淀细胞重悬，37℃恒温摇床中孵育0.5～1.5h，离心沉淀，弃上清，采用PBS缓冲液清洗沉淀细胞。

S4，DAPI染核：向步骤S3离心清洗后的沉淀细胞中加入DAPI染液，吹打使沉淀细胞重悬，常温避光孵育4～10min，离心沉淀细胞，弃上清，采用PBS缓冲液清洗沉淀细胞。

S5，封片：向步骤S4中离心清洗后的沉淀细胞中加入PBS缓冲液，吹打使沉淀细胞重悬均匀，得细胞悬液；在载玻片上滴加抗荧光封片剂，再滴加细胞悬液至抗荧光封片剂中，盖上盖玻片，避光静置晾干，得待检样品。

在其中一些实施例中，所述山羊血清的含量为10％。

优选地，步骤S2和步骤S3中，37℃恒温摇床中孵育1h。

优选地，每个步骤中，采用PBS缓冲液清洗的次数为3～4次。

优选地，在步骤S4中细胞悬液的体积为80～120μL，在载玻片上滴加30μL抗荧光封片剂，再滴加30μL细胞悬液至抗荧光封片剂中。

在其中一些实施例中，所述悬浮细胞选自NR8383、U266、大鼠神经干细胞。

本发明还提供一种悬浮细胞免疫荧光检测方法，包括如下步骤：按照上述悬浮细胞孵育染色方法制备待检样品；镜检。

本发明的有益效果为：

与现有技术相比，本发明悬浮细胞孵育染色方法仅依次通过固定、一抗孵育、二抗孵育、DAPI染核以及封片的步骤就能够实现对悬浮细胞的通透染色，减少了涂片、风干/烘干、细胞通透等实验环节，可以有效节省试验时间，同时避免风干/烘干对实验背景的较大影响，增强溶液对细胞的渗透效果。

附图说明

图1为实施例1的NR8383细胞的免疫荧光检测图片。

图2为对比例1的NR8383细胞的免疫荧光检测图片。

图3为实施例2的U266细胞的免疫荧光检测图片。