[发明专利]一种蛹虫草规模化生产方法与应用

权利要求书

1.一种蛹虫草的规模化生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一蛹虫草海宁株C. militaris 菌种选育

1）选种：选择生长健壮、没有冷凝水或有冷凝水且水珠澄清透明、子实体根部无白色气生菌丝的长到2~3cm高的家蚕蛹虫草海宁株子实体；

2）菌种培育：在无菌环境中，采用无菌接菌钩，钩断子实体根，取出子实体，置于灭菌的纱布上，用无菌镊子夹住子实体根部，依次通过75%酒精擦拭子实体表面、无菌水清洗其表面残留的酒精、无菌手术刀去除子实体的表皮，再选取子实体顶端1~1.5cm长的部位，每1cm分成3~5粒，用无菌接种钩将子实体小粒置于PDA固体培养基上，子实体粒间隔约3.5cm，在22℃生化培养箱内遮光倒置培养至出现菌丝；

3）菌种纯化：在无菌环境中，用接种环选取菌种培育环节获得的一环菌丝、采用连续平板划线进行菌种分离和纯化，在21~23℃生化培养箱内倒置培养至菌丝长到高度约0.5cm；

步骤二菌种制备

按照每120mL液体培养基接种量为1cm×1cm的比例，用无菌手术刀挑取步骤一的菌种纯化所得的平板单菌落并切碎，迅速转接于锥形瓶内的液体培养基中，轻摇使菌种均匀分布，扎紧瓶口，于震荡摇床中22℃、170rpm、避光培养，待菌丝呈雪白色、均匀、浓密、穿透力强、无异味，且菌落生长大于培养基平面的1/2面积，即为质量合格的可栽培的菌种；

步骤三栽培

1）发菌初期培养：采用全自动开盖、接种和复盖一体机，向培养瓶中迅速注入2mL菌液后加盖，在温度为15~18℃、空气相对湿度为63~68%条件下黑暗培养3~5天，保留菌丝呈雪白色，长势均匀、浓密、穿透力强、无异味的继续培养至菌丝全部长满整个培养基，当料面产生数量不等、大小不一的多个圆丘状隆起时，即进入光培养菌株分化前期进行培养；所述培养瓶中装有40g菌种栽培培养基，高约2cm；

2）菌株分化前期培养：将培养瓶置于温度为18℃~23℃，空气相对湿度≥85%，光照强度为200~250Lx的条件下进行光培养3~10天，至培养基料面菌丝逐渐由白色变为橘黄色后，继续培养1~3天即可进入原基期；在光培养过程中每天光照12h以上，但不能连续照射，保证每日6h黑暗培养，防止太阳光直射；

3）菌株分化原基期培养：在空气相对湿度为68~72%条件下，采用温差刺激进行培养10天，即可形成原基，待大量原基形成后保持温度为20~23℃，空气相对湿度逐渐加大至85%~90%，光照时间延长至15h；继续培养1~3天，原基顶端开始出现椎状子实体即可进入子实体生长前期；所述温差刺激分为白昼和夜晚两部分，白昼温度为18~23℃，光照强度为50~100Lx，时间12-14h；夜晚温度为5-8℃，时间为6-10h；

4）子实体生长前期：生长前期子实体呈橘黄色，高1~2cm，将其置于温度为22℃~25℃，空气相对湿度为85%~90%的环境中，每天采用散射光或日光灯进行不连续光照500Lx照射18h，培养20~30天，子实体高2~4cm，呈长圆锥形时，即可转入子实体生长后期；

5）子实体生长后期：在温度为20~23℃，空气相对湿度为85%~90%，光照强度1000Lx条件下培养10~20天，且每日光照时间为18h，至子实体不再增粗、增长，且头部开始膨大，条状、生长健壮、橙黄色为生长良好的子实体；

步骤四采收储存

1）子实体采摘：蛹虫草子实体呈橘黄色、头部膨大并有子囊壳出现、表面有黄色粉末状物出现即为成熟，采用全自动开盖、倒置采摘、培养基清理一体机及时采摘；采收后的培养基可循环使用进行二次栽培；

2）子实体干燥及储存：采摘的蛹虫草子实体采用冷冻干燥后于干燥、阴凉处保存。

2.如权利要求1所述一种蛹虫草的规模化生产方法，其特征在于，所述PDA固体培养基的制备方法：取PDA37g、蚕蛹粉5g、加入纯净水800mL加热溶解，搅拌均匀后补足水分至1L，按要求分装后 121℃、30min灭菌备用。

3.如权利要求1所述一种蛹虫草的规模化生产方法，其特征在于，所述菌种纯化采用的培养基的制备方法：取PDA 37g，加水1L加热溶解，充分拌匀后于121℃、30min灭菌备用。