[发明专利]一种外泌体PD-L1糖基化检测方法在审
| 申请号： | 202111675939.4 | 申请日： | 2021-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN114354913A | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 杨朝勇;宋彦龄;康思因;尤振龙;王文成;张弛;朱琳 | 申请（专利权）人： | 厦门大学 |
| 主分类号： | G01N33/53 | 分类号： | G01N33/53;C12Q1/682 |
| 代理公司： | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人： | 张松亭;游学明 |
| 地址： | 361000 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 外泌体 pd l1 糖基化 检测 方法 | ||
1.一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，包括如下步骤：
1)用PD-L1适体即序列PDL1-S-T1，标记外泌体PD-L1；
2)通过修饰环炔基DBCO的DNA即序列DBCO-S-T2，与代谢标记的外泌体表面糖上叠氮的无铜环加成反应标记外泌体的糖；
3)加入DNA连接臂，所述的连接臂分别具有和序列PDL1-S-T1的至少一段序列互补的序列以及和序列DBCO-S-T2的至少一段序列互补的序列；
4)加入探针H1和H2，其中，所述的探针H1和探针H2部分互补，且其中一探针分别具有和序列PDL1-S-T1的至少一段序列互补的序列以及和序列DBCO-S-T2的至少一段序列互补的序列；
5)扩增，检测扩增信号，得到外泌体PD-L1糖基化信息。
2.根据权利要求1所述的一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，其特征在于：序列PDL1-S-T1上与探针H1或H2互补的序列，和序列PDL1-S-T1上与连接臂互补的序列不重叠；序列DBCO-S-T2上与探针H1或H2互补的序列，和序列DBCO-S-T2上与连接臂互补的序列不重叠。
3.根据权利要求1所述的一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，其特征在于：步骤3)中，所述的连接臂长度为20个-80个碱基。
4.根据权利要求1所述的一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，其特征在于：序列PDL1-S-T1和连接臂互补的片段优选位于中间10-20个碱基。
5.根据权利要求1所述的一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，其特征在于：序列DBCO-S-T2和连接臂互补的片段优选位于中间10-20个碱基。
6.根据权利要求3所述的一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，其特征在于：序列PDL1-S-T1上与探针H1或H2互补的序列位于序列PDL1-S-T1的末端10-20个碱基,序列DBCO-S-T2上与探针H1或H2互补的序列位于序列DBCO-S-T2的末端5-15个碱基。
7.根据权利要求1所述的一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，其特征在于：步骤5)所述的扩增为HCR扩增。
8.根据权利要求1-7所述的一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，其特征在于：探针H1分别具有和序列PDL1-S-T1的至少一段序列互补的第一序列、和序列DBCO-S-T2的至少一段序列互补的第二序列以及和H2的一段序列互补的第三序列；探针H2具有和探针H1第三序列互补的序列，以及和第一序列、第二序列互补的序列。
9.根据权利要求1-7任一项所述的一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，其特征在于：步骤5)的检测采用荧光检测。
10.根据权利要求9所述的一种外泌体PD-L1糖基化检测方法，其特征在于：所述的荧光检测为Alexa Fluor 488或者FAM探针，序列T1或T2上无修饰基团。
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