[发明专利]一种肿瘤细胞捕获芯片的捕获结果判读方法及系统

权利要求书

1.一种肿瘤细胞捕获芯片的捕获结果判读方法，其特征在于，依次包括如下步骤：

A、提供细胞捕获实验后的肿瘤细胞捕获芯片，所述肿瘤细胞捕获芯片经过标记有第一荧光分子的CK抗体、标记有第二荧光分子的CD45抗体及细胞核荧光染料孵育处理，其中所述第一荧光分子、所述第二荧光分子及所述细胞核荧光染料的淬灭速度及所激发荧光的颜色互不相同；

B、用第一激发光源对所述捕获芯片进行照射，采集第一荧光通道内的荧光图像，其中所述第一激发光源的波长与所述第一荧光分子、所述第二荧光分子及所述细胞核荧光染料三者中淬灭速度最大的一者的激发波长相对应；

C、用第二激发光源对所述捕获芯片进行照射，采集第二荧光通道内的荧光图像，其中所述第二激发光源的波长与所述第一荧光分子、所述第二荧光分子及所述细胞核荧光染料三者中淬灭速度居中的一者的激发波长相对应；

D、用第三激发光源对所述捕获芯片进行照射，采集第三荧光通道内的荧光图像，其中所述第三激发光源的波长与所述第一荧光分子、所述第二荧光分子及所述细胞核荧光染料三者中淬灭速度最小的一者的激发波长相对应；

E、将三个荧光通道的荧光图像相互拼合，若图片中某一光点同时存在第一荧光分子和细胞核荧光染料所对应的荧光颜色且不存在第二荧光分子所对应的荧光颜色，则判断该光点存在肿瘤细胞，对这类光点进行计数获得捕获芯片上的肿瘤细胞数量。

2.根据权利要求1所述的捕获结果判读方法，其特征在于，所述第一荧光分子和所述第二荧光分子中一者为FITC而另一者为TRITC，所述细胞核荧光染料为DAPI。

3.根据权利要求2所述的捕获结果判读方法，其特征在于，所述CK抗体标记有FITC，所述CD45抗体标记有TRITC；所述第一激发光源的波长对应FITC的激发波长，所述第二激发光源的波长对应TRITC的激发波长，所述第三激发光源对应DAPI的激发波长；步骤E中，若图片中某一光点上存在黄绿色荧光和蓝色荧光且不存在橙红色荧光，则判断该光点存在肿瘤细胞。

4.根据权利要求3所述的捕获结果判读方法，其特征在于，通过显微镜相机采集各荧光通道的荧光图像，其中，所述第一荧光通道的图像采集参数为曝光300ms，增益13.98；所述第二荧光通道的图像采集参数为曝光142ms，增益0；所述第三荧光通道的图像采集参数为曝光100ms，增益0。

5.根据权利要求1所述的捕获结果判读方法，其特征在于，所述肿瘤细胞捕获芯片还经过标记有第三荧光分子的肿瘤标志物抗体孵育处理，所述捕获结果判读方法还包括定性检测步骤：用第四激发光源对所述捕获芯片进行照射，采集第四荧光通道内的荧光图像，若已判定存在肿瘤细胞上的光点上还存在第三荧光分子的激发荧光，则判定该肿瘤细胞为所述肿瘤标志物对应种类的肿瘤细胞。

6.根据权利要求5所述的捕获结果判读方法，其特征在于，所述第三荧光分子为AF647荧光分子，若定性检测步骤中，所述光点上还存在红色荧光，则判断该光点处的肿瘤细胞具有所述肿瘤标志物的表达；和/或，所述肿瘤标志物抗体选自PD-L1抗体、HER2-抗体、ARV7抗体中的一种。