[发明专利]一种肿瘤细胞捕获芯片的捕获结果判读方法及系统

说明书

本发明公开了一种肿瘤细胞捕获芯片的捕获结果判读方法及系统，其判读结果较为准确。该捕获结果判读方法，依次包括：提供细胞捕获实验后的肿瘤细胞捕获芯片，肿瘤细胞捕获芯片经过标记有第一荧光分子的CK抗体、标记有第二荧光分子的CD45抗体及细胞核荧光染料孵育处理，第一荧光分子、第二荧光分子及细胞核荧光染料的淬灭速度及荧光颜色互不相同；用第一激发光源对捕获芯片进行照射，采集荧光图像；用第二激发光源对捕获芯片进行照射，采集荧光图像；用第三激发光源对捕获芯片进行照射，采集荧光图像；将荧光图像拼合，若某一光点同时存在第一荧光分子和细胞核荧光染料的荧光颜色且不存在第二荧光分子所对应的荧光颜色，则判断该光点存在肿瘤细胞。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种肿瘤细胞捕获芯片的捕获结果判读方法及系统。

背景技术

目前，微流控技术已应用于CTC细胞(循环肿瘤细胞)分选，其中捕获芯片是重要的组成元件，其中的一种捕获芯片为包被有能够和目标分子或细胞特异性结合的抗体的网状芯片。江苏汇先医药技术有限公司的CytoBot2000仪所使用的一次性耗材TIP头即内置这种网状捕获芯片，网状芯片表面结合有抗体，从而能够和靶细胞特异性结合，实现细胞捕获和分选。结合到捕获芯片上的细胞，通过荧光抗体标记技术进行计数。然而，细胞的荧光抗体标记技术存在一定的非特异性，其主要原因如下：(1)抗体与细胞膜表面标志物结合的非特异性，以及(2)生物个体内涉及膜结构交换的细胞间通讯(例如基于外泌体形式的细胞间通讯)。上述两大方向原因会导致一些非目标细胞被标记有荧光分子的抗体结合，并显出不同可见强度的荧光信号，我们将这部分信号定义为背景噪声。还需要声明的一点是：荧光信号在不同类型及强度的激发光源激发下，其信号的淬灭速率是不同的，荧光信号的淬灭也会干扰我们对结果的判读。现有的CTC细胞捕获及荧光抗体染色的判读主要依赖于操作人员的肉眼识别及主观判断，这种判读方式在小规模的科研水平是可行的，但不利于大规模的推广。

基于上述原因，在背景噪声的影响下，需要建立一套标准共识以提高对荧光结果判读的一致性与准确性。

发明内容

针对上述技术问题中，本发明的目的是提供一种肿瘤细胞捕获芯片的捕获结果判读方法及系统，判读结果较为准确。

根据本发明的第一个方面，一种肿瘤细胞捕获芯片的捕获结果判读方法，依次包括如下步骤：

A、提供细胞捕获实验后的肿瘤细胞捕获芯片，所述肿瘤细胞捕获芯片经过标记有第一荧光分子的CK抗体、标记有第二荧光分子的CD45抗体及细胞核荧光染料孵育处理，其中所述第一荧光分子、所述第二荧光分子及所述细胞核荧光染料的淬灭速度及所激发荧光的颜色互不相同；

B、用第一激发光源对所述捕获芯片进行照射，采集第一荧光通道内的荧光图像，其中所述第一激发光源的波长与所述第一荧光分子、所述第二荧光分子及所述细胞核荧光染料三者中淬灭速度最大的一者的激发波长相对应；

C、用第二激发光源对所述捕获芯片进行照射，采集第二荧光通道内的荧光图像，其中所述第二激发光源的波长与所述第一荧光分子、所述第二荧光分子及所述细胞核荧光染料三者中淬灭速度居中的一者的激发波长相对应；

D、用第三激发光源对所述捕获芯片进行照射，采集第三荧光通道内的荧光图像，其中所述第三激发光源的波长与所述第一荧光分子、所述第二荧光分子及所述细胞核荧光染料三者中淬灭速度最小的一者的激发波长相对应；

E、将三个荧光通道的荧光图像相互拼合，若图片中某一光点同时存在第一荧光分子和细胞核荧光染料所对应的荧光颜色且不存在第二荧光分子所对应的荧光颜色，则判断该光点存在肿瘤细胞，对这类光点进行计数获得捕获芯片上的肿瘤细胞数量。

在一实施例中，所述第一荧光分子和所述第二荧光分子中一者为FITC而另一者为TRITC，所述细胞核荧光染料为DAPI。