[发明专利]用于结直肠癌检测的组合物、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种用于结直肠癌检测的组合物，其特征在于，包含用于检测ADHFE1基因、PPP2R5C基因和SDC2基因甲基化状态的试剂。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述试剂包括引物组和探针，

所述引物组包括：

(a-1)SEQ ID NO:3～SEQ ID NO:40所示序列中的至少一条；

(b-1)SEQ ID NO:41～SEQ ID NO:60所示序列中的至少一条；以及

(c-1)SEQ ID NO:61～SEQ ID NO:98所示序列中的至少一条；

所述探针包括：

(a-2)SEQ ID NO:100～SEQ ID NO:112所示序列中的至少一个，

(b-2)SEQ ID NO:113～SEQ ID NO:127所示序列中的至少一个，

(c-2)SEQ ID NO:128～SEQ ID NO:142所示序列中的至少一个。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述引物组进一步包括SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:2所示序列；

所述探针进一步包括SEQ ID NO:99所示序列。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，用于检测ADHFE1基因的试剂包括SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:127所示序列；

用于检测PPP2R5C基因的试剂包括SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:139所示序列；

用于检测SDC2基因的试剂包括SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:101所示序列；

任选地，所述组合物还包括用于检测GAPDH基因的试剂，所述用于检测GAPDH基因的试剂包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:99所示的序列。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括选自下列中的至少一种：

PCR缓冲液、盐离子、dNTP、DNA聚合酶或者靶标核酸。

6.一种用于结直肠癌诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～5中任一项所述的组合物。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括下列试剂中的至少一种：

DNA提取试剂、DNA甲基化转化试剂、核酸纯化试剂。

8.一种确定样品中基因甲基化状态的方法，其特征在于，所述基因包括ADHFE1基因、PPP2R5C基因和SDC2基因，

所述方法包括：

(1)获取基因组DNA，所述基因组DNA来自于所述样品；

(2)对所述基因组DNA进行甲基化转化处理，以便获得转化产物，所述基因组DNA经过甲基化处理，甲基化位点和非甲基化位点表现出差异；

(3)利用引物组和探针对所述转化产物进行荧光定量PCR检测，以便确定样品中基因甲基化状态。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述样品包括选自组织样品、血液样品、分泌物或者排泄物中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述排泄物包括粪便样本。