[发明专利]用于结直肠癌检测的组合物、试剂盒及应用

说明书

提供了一种用于结直肠癌检测的组合物、试剂盒及应用。所提供的组合物包含用于检测ADHFE1基因、PPP2R5C基因和SDC2基因甲基化状态的试剂，可以用来检测结直肠癌，具有高的灵敏度和特异性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于结直肠癌检测的组合物、试剂盒及应用。

背景技术

发生在下消化道结肠、直肠部位的结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤。据最新统计数字显示，全世界范围内结直肠癌的新发病例数在男性中排第三位、在女性中排第二位，死亡比例数在男性中排第四位、女性中排第三位(Bray等，2018)。在我国，结直肠癌的防控形势也十分严峻，为恶性肿瘤新发病例的第三位(38.8万人)、死亡病例的第五位(18.7万人)(郑荣寿等，2019)。结直肠癌发展缓慢，一般会经历息肉、腺瘤、肠癌等过程，从腺瘤发展成为肠癌时间可长达5-10年。而如在结直肠癌发展早期进行干预，可显著降低死亡率。I期结直肠癌患者的五年生存率可达90％以上，而IV期结直肠癌患者的五年生存率低于20％(Marzieh Araghi等，2020)。

传统的结直肠癌早筛技术主要有肠镜、大便潜血试验、肿瘤标志物CEA和CA19-9等，这些技术手段目前均存在一定的局限性。肠镜检测是肠癌诊断的金标准，通过从肛门插入镜头及光源，循腔经直肠、乙状结肠等部位可达回肠末端，图像可实时传输到显示器上，供操作医生观察。肠镜的图像直观、清晰，可观察到癌、息肉、溃疡、出血等多种病变，还可对息肉等进行镜下摘除等操作。但其为一种侵入性的检测技术，准备过程复杂，需控制饮食及进行肠道清洁，待检者的依从性低。且对设备和人员有要求，需要在医院专业人员和麻醉师操作，部分受检者会有不适感并且有产生并发症的风险(3-5例/1000人)。大便潜血试验是一种无创的方法，通过检测大便中的血液成分(血红蛋白)来判别有无消化道出血，以便医生判断肠癌风险。该方法快捷简便，待检者依从性较高。但该检测方法易受到饮食中的肝脏、血液制品、绿叶蔬菜等影响出现假阳性，同时对出血量较少的早期结直肠癌患者的灵敏度低，易出现漏诊。而CEA等作为广谱的肿瘤标志物，特异度低，易产生较多的假阳性，灵敏度亦有限。因此，需要建立一种准确、简便、经济的结直肠癌早期筛查方法。

DNA甲基化是一种重要的基因表达调控机制，能够调节基因的表达和沉默，在肿瘤的发生发展中具有重大的影响。癌症相关基因的异常甲基化常出现于癌症发生的早期，因此DNA甲基化信号被认为是有潜力的肿瘤早期筛查标志物。人的粪便样本中混杂有肠道细胞DNA，这些DNA携带有甲基化等信息，通过检测和分析这些信息，可推断受检者罹患肠癌的可能性。已有部分基因被证明了可以作为粪便中肠癌检测的甲基化标志物，例如SFRP2，SEPT9，NDRG4和SDC2等(Hannes M Müller等，2004；Jie Chen等，2019)，但它们的性能尚不能完全满足临床需求，例如SFRP2对肠癌的灵敏度和特异性仅为77％(Hannes M Müller等，2004)。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一，提供了一种用于结直肠癌检测的组合物、试剂盒及应用。所提供的组合物可以用来检测结直肠癌，其特异性和灵敏度均很高，可以辅助临床检测，丰富结直肠癌的诊断和检测。

具体而言，本发明提供了如下技术方案：

在本发明的第一方面，本发明提供了一种用于结直肠癌检测的组合物，包含用于检测ADHFE1基因、PPP2R5C基因和SDC2基因甲基化状态的试剂。

在本发明的第二方面，本发明提供了一种用于结直肠癌诊断的试剂盒，所述试剂盒包括上述第一方面用于结直肠癌检测的组合物。

在本发明的第三方面，本发明提供了一种确定样品中基因甲基化状态的方法，所述基因包括SDC2基因、ADHFE1和PPP2R5C基因，所述方法包括：

(1)获取基因组DNA，所述基因组DNA来自于所述样品；