[发明专利]一种分析CD303+树突状细胞亚群表型和功能的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于分析CD303⁺树突状细胞亚群表型和功能的抗体组合配方，其包括：CD303抗体、CD205抗体、CD103抗体、IL-12抗体和TGF-β抗体。

2.如权利要求1所述的抗体组合配方在分析CD303⁺树突状细胞亚群表型和功能或制备分析CD303⁺树突状细胞亚群表型和功能的产品中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其中，所述产品包括试剂盒和/或检测试剂。

4.一种分析CD303⁺树突状细胞亚群表型和功能的试剂盒，其包括如权利要求1所述的抗体组合配方；

其中，所述抗体组合配方由五种不同的荧光色素进行标记。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述荧光色素选自BV421、BV711、PerCP-Cy5.5、Pacific blue、PE-CF594、FITC、PE-Cy7、Amcyan、APC-Cy7或Q-Dot中的任意五种，优选为BV421、BV711、PerCP-Cy5.5、Pacific blue和PE-CF594。

6.一种鉴定CD303⁺树突状细胞亚群表型和功能的方法，其采用如权利要求1所述的抗体组合配方或如权利要求4或5所述的试剂盒进行检测，所述方法包括：

将待测细胞与不同荧光色素标记的CD205抗体、CD103抗体和CD303抗体混合，进行首次孵育，染色，固定；以及

将所得细胞进行透化处理，再与不同荧光色素标记的IL-12抗体和TGF-β抗体混合，进行再次孵育。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述方法包括如下步骤：

(1)预处理外周血，分离得到树突状细胞后加入白细胞刺激因子；

(2)将步骤(1)得到的细胞染色，加入不同荧光色素标记的CD205抗体、CD103抗体和CD303抗体进行首次孵育，再次染色，而后将得到的细胞用福尔马林溶液固定；

(3)将步骤(2)所得的细胞重悬于细胞穿透液，离心后将沉淀的细胞再次重悬于细胞穿透液，加入不同荧光色素标记的IL-12抗体和TGF-β抗体，进行再次孵育；

(4)将步骤(3)所得的细胞重悬于细胞穿透液中，离心后将沉淀细胞重悬于细胞染色液，用流式细胞仪进行分析检测，得到CD303⁺树突状细胞亚群表型和功能。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，步骤(1)所述外周血的体积为10～100μL；

优选地，步骤(1)所述白细胞刺激因子的体积浓度为0.08～0.1％；

优选地，步骤(2)所述首次孵育的时间为20～60min，优选为25～35min；

优选地，步骤(2)所述首次孵育的温度为16～28℃；

优选地，步骤(2)所述福尔马林溶液的质量分数为2～4％；

优选地，步骤(3)所述再次孵育的条件为4℃避光孵育10～15h或16～28℃避光孵育20～40min。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中，所述分析检测包括如下步骤：

通过CD303抗体得到CD303分子的表达情况，分析树突状细胞亚群表型CD303⁺的比例；

通过CD103抗体和CD205抗体得到CD103分子和CD205分子的表达情况，分析CD303⁺树突状细胞亚群的分化成熟状况；和

通过IL-12抗体和TGF-β抗体得到IL-12分子和TGF-β分子的分泌表达情况，分析CD303⁺树突状细胞亚群的功能。