[发明专利]一种分析CD303+树突状细胞亚群表型和功能的方法及试剂盒

说明书

本申请提供了一种分析CD303+树突状细胞亚群表型和功能的方法及试剂盒。所述试剂盒包括CD303、CD205、CD103、IL‑12和TGF‑β的特异性抗体组成的抗体组合配方，其检测对象包括CD303、CD205、CD103、IL‑12和TGF‑β。本申请的检测试剂盒可用于高效快速地鉴别外周血中CD303+树突状细胞亚群表型同时分析其功能，保证准确率的同时降低因检测大量表面抗原分子导致的经济成本，且检测方法简单易行。

技术领域

本申请属于生物技术领域，具体涉及用流式细胞光度术进行免疫检测分析人外周血树突状细胞，尤其涉及一种用于临床免疫检测分析CD303⁺树突状细胞亚群表型和功能的试剂盒及应用。

背景技术

树突状细胞(Dendritic cell，DC)作为体内免疫系统中起主要调控作用的细胞，是免疫学研究热点之一。目前，树突状细胞的检测主要依靠流式细胞分析技术，但测定树突状细胞的分析方案多种多样，没有统一的标准模式。这主要是由于树突状细胞的研究日新月异，多个不同的树突状细胞亚型已被报导发现；而针对树突状细胞的流式细胞分析方案未免粗放，已不能满足目前临床针对不同亚型的树突状细胞的精确分析要求。

流式细胞仪(Flow cytometry)是对细胞进行自动分析和分选的装置，主要由四部分组成，包括流动室和液流系统、激光源和光学系统、光电管和检测系统以及计算机和分析系统。流式细胞仪可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞仪是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标。

流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。其常用的技术指标有荧光分辨率、荧光灵敏度、适用样品浓度、分选纯度、可分析测量参数等。

未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。在实际使用中，仪器首先要对光散射信号进行测量。当光散射分析与荧光探针联合使用时，可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。光散射测量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群。荧光信号主要包括两部分：①自发荧光，即不经荧光染色，细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光；②特征荧光，即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光，其荧光强度较弱，波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。

在免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例如核黄素、细胞色素等)的含量越高，自发荧光越强；培养细胞中死细胞/活细胞比例越高，自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是：①尽量选用较亮的荧光染料；②选用适宜的激光和滤片光学系统；③采用电子补偿电路，将自发荧光的本底贡献予以补偿。

CD303⁺树突状细胞分布于人外周血中，是近年来新发现的一个树突状细胞亚群。临床和基础研究表明，CD303⁺树突状细胞亚群在多种疾病的发生中起重要作用，例如某些恶性肿瘤如肺癌，黑色素瘤，前列腺癌和肾癌，皮炎，某些病毒感染如HIV-1感染，某些传染病如疟疾感染以及一些自身免疫病如类风湿关节炎等；在这些疾病中，CD303⁺树突状细胞都显现出表型和功能的异常。因此，CD303⁺树突状细胞的表型和功能测定临床数据可成为临床医生判断上述疾病发展状况和临床治疗效果的辅助判断指标之一，具有十分重要的临床诊断意义。

通过流式细胞仪鉴定树突状细胞亚群通常需要分离提取外周血单核细胞，该过程复杂繁琐，时间周期长，若通过细胞分子表面抗原检测的方式分析细胞亚群则通常选择大量树突状细胞表面抗原分子进行检测，提高检测的准确性和特异性，但大量表面抗原的检测分析需要较长时间并提高了检测的经济成本，不利于快速高效地进行树突状细胞亚群分析研究。