[发明专利]修饰的PIGGYBAC转座酶多肽、编码它们的多核苷酸、引入载体、试剂盒、将靶序列整合到细胞基因组中的方法以及生产细胞的方法

权利要求书

1.修饰的piggyBac转座酶多肽，其包含：

piggyBac转座酶氨基酸序列；和

核定位信号氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述piggyBac转座酶氨基酸序列具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列和SEQ ID NO:2的氨基酸序列中的至少一种。

3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中所述核定位信号氨基酸序列是其中人免疫缺陷病毒(HIV)的TAT(转录反式激活因子)蛋白的核定位信号与猿猴病毒40(SV40)的大T抗原蛋白的核定位信号相连接的肽。

4.根据权利要求3所述的多肽，其中所述核定位信号氨基酸序列是其中SEQ ID NO:4的氨基酸序列与SEQ ID NO:3的氨基酸序列相连接的肽。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽，其进一步包含促进细胞分裂的肽的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述的多肽，其中所述促进细胞分裂的肽的氨基酸序列具有SEQ IDNO:15的氨基酸序列。

7.编码修饰的piggyBac转座酶的多核苷酸，其包含：

编码piggyBac转座酶的碱基序列；和

编码核定位信号的碱基序列。

8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是DNA或RNA。

9.根据权利要求7或8所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是DNA并且所述编码piggyBac转座酶的碱基序列具有SEQ ID NO:5的序列。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的多核苷酸，其中与构成所述修饰的piggyBac转座酶的氨基酸相对应的密码子中的至少一个密码子针对人进行了优化。

11.根据权利要求10所述的多核苷酸，其中“针对人进行了优化”是针对下述每个氨基酸使用以下密码子：

丙氨酸(A)的密码子为GCU或GCC；

半胱氨酸(C)的密码子为UGC或UGU；

天冬氨酸(D)的密码子为GAC或GAU；

谷氨酸(E)的密码子为GAA或GAG；

苯丙氨酸(F)的密码子为UUC或UUU；

甘氨酸(G)的密码子为GGA或GGC；

组氨酸(H)的密码子为CAC或CAU；

异亮氨酸(I)的密码子为AUC或AUU；

赖氨酸(K)的密码子为AAA或AAG；

亮氨酸(L)的密码子为CUC或CUG；

甲硫氨酸(M)的密码子为AUG；

天冬酰胺(N)的密码子为AAC或AAU；

脯氨酸(P)的密码子为CCC或CCU；

谷氨酰胺(Q)的密码子为CAA或CAG；

精氨酸(R)的密码子为AGA或AGG；

丝氨酸(S)的密码子为AGC、UCC或UCU；

苏氨酸(U)的密码子为ACA或ACC；

缬氨酸(V)的密码子为GUC或GUG；

色氨酸(W)的密码子为UGG；

酪氨酸(Y)的密码子为UAC或UAU；和

终止子的密码子为UGA；

其中A是腺嘌呤，U是尿嘧啶，C是胸腺嘧啶，G是鸟嘌呤，并且当所述多核苷酸是DNA时，U变为胸腺嘧啶(T)。

12.根据权利要求7至11中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是DNA并且所述编码piggyBac转座酶的碱基序列具有SEQ ID NO:6或7的序列。

13.根据权利要求7至12中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是DNA并且所述编码核定位信号的碱基序列具有SEQ ID NO:8、9或10的序列。