[发明专利]修饰的PIGGYBAC转座酶多肽、编码它们的多核苷酸、引入载体、试剂盒、将靶序列整合到细胞基因组中的方法以及生产细胞的方法

说明书

一般而言，根据一个实施方案，修饰的piggyBac转座酶多肽包括piggyBac转座酶氨基酸序列和核定位信号氨基酸序列。

相关申请的交叉引用

本申请基于并要求2020年6月10日提交的日本专利申请第2020-101013号的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

领域

本发明的实施方案涉及修饰的piggyBac转座酶多肽、编码它们的多核苷酸、引入载体、试剂盒、将靶序列整合到细胞基因组中的方法以及生产细胞的方法。

背景

转座子法作为将靶序列整合到细胞基因组中的方法受到关注。在转座子方法中，使用一种称为转座酶的酶。转座酶具有切除两端具有识别序列的靶序列并将该靶序列插入基因组的功能。例如，蛾衍生的piggyBac转座酶是已知的。

将靶序列整合到细胞基因组中的技术已应用于各种领域，例如转基因细胞、转基因动物的生产、基因治疗和再生医学。因此，对整合技术的效率和简化的需求日益增加。

附图简要说明

图1是示例第一实施方案的修饰的piggyBac转座酶的实例的图。

图2是示例实施方案的将靶序列整合到细胞基因组中的方法的实例的流程图。

图3是示例实施方案的供体DNA的实例的图。

图4也是示例使用实施方案的修饰的piggyBac转座酶将靶序列整合到细胞基因组中的过程的实例的示意图。

图5是示例实施方案的各引入载体的实例的剖视图。

图6是示例第二实施方案的修饰的piggyBac转座酶的实例的图。

图7是示例实施例5的实验结果的图表。

图8是示例实施例6的实验结果的图表。

图9是示例实施例7的实验结果的图表。

图10是示例实施例8的实验结果的图表。

实施方案的说明

一般而言，根据一个实施方案，修饰的piggyBac转座酶多肽包括piggyBac转座酶氨基酸序列和核定位信号氨基酸序列。

在下文中，将参照附图描述实施方案。注意，在各实施方案中，对实质上相同的成分标注相同的附图标记，并省略其部分说明。附图为示意图，各部分的厚度与平面尺寸之间的关系、各部分的厚度比例等可能与实际有所不同。

根据实施方案，提供了修饰的piggyBac转座酶。当本文简称为“修饰的piggyBac转座酶”时，它指的是修饰的piggyBac转座酶多肽的形式。根据另一个实施方案，还可以提供编码修饰的piggyBac转座酶的多核苷酸。

实施方案的修饰的piggyBac转座酶可用于例如将靶序列整合到细胞基因组中。因此，根据进一步的实施方案，还提供了使用修饰的piggyBac转座酶将靶序列整合到细胞基因组中的方法、其中使用的试剂盒以及生产细胞的方法。在下文中，将描述每个实施方案。

(第一实施方案)

-修饰的piggyBac转座酶

如图1所示，第一实施方案的修饰的piggyBac转座酶1包括核定位信号结构域2和piggyBac转座酶结构域3。在下文中，将核定位信号结构域2也称为“NLS结构域”，将piggyBac转座酶结构域3也称为“PB结构域”。