[发明专利]糖基氟化物的合成

说明书

本发明涉及一种产生目的糖基氟化物的方法，该方法包括提供内化的外源性前体和遗传修饰细胞，其中可以在遗传修饰细胞中对外源性前体进行一种或多种糖基化反应，该遗传修饰细胞包含编码一种或多种糖基转移酶的一种或多种核酸序列。本发明还涉及下式：2b的化合物：

技术领域

本发明涉及一种使用生物技术方法用于产生糖基氟化物的方法。

背景技术

糖基氟化物是碳水化合物衍生物，可以描述为α-卤代醚。它们可以以两种异头物形式获得，但α-异头物更稳定。

糖基氟化物和其他糖基卤化物一样，是合成复杂寡糖的重要构建模块。

与其他糖基卤化物相比，糖基氟化物显示出显著的稳定性。事实上，它们是唯一可以脱保护并溶解在水中的糖基卤化物。此外，大多数脱保护的糖基氟化物是结晶化合物，可以长期储存而不分解。

由于其稳定性，这类化合物在化学和生物化学中都有许多应用(KazunobuToshima,Carbohydr.Res.2000,327,15-26；Spencer J.Wiliams,Stephen G.Withers,Carbohydr.Res.2000,327,27-46)。例如，它们可以用作化学糖基化反应中的供体或受体。特别是，它们可以在蔗糖的水性糖基化中作为供体被激活(Guillaume Pelletier,AaronZwicker,C.Liana Allen,Alanna Schepartz,Scott J.Miller,J.Am.Chem.Soc.2016,138,3175-3182)，或者与硫代糖苷结合使用以进行正交糖基化(Osamu Kanie,Yukishige Ito,Tomoya Ogawa,Tetrahedron Lett.1996,37,4551-4554)。糖基氟化物也可以在酶反应中发挥多种作用。它们已被用作野生型和突变糖苷酶的底物，作为机械探针和作为酶促转糖基化反应中的供体(Spencer J.Wiliams,Stephen G.Withers,Carbohydr.Res.2000,327,27-46)。

在碳水化合物单元上安装氟化物需要化学合成。有几种方法可用于单糖或双糖的氟化(Masataka Yokoyama,Carbohydr.Res.2000,327,5–14)。这些方法易于获得简单的糖基氟化物，其可以用作制备复杂结构的构建模块。

有趣的是，由于其稳定性，糖基氟化物可以用作糖受体，从而能够制备在还原端保留良好离去基团的寡糖，并可以在随后的糖基化反应中用作供体。可作为糖基供体的复杂寡糖是一类有价值的化合物，因为它们可用于制备糖缀合物(US20090170155A1)。

糖基氟化物构建模块可以通过化学合成或酶促合成转化为复杂结构。然而，对于大规模产生寡糖氟化物，这两种方法都有一些局限性。

与化学合成相关的常见挑战是立体化学和区域化学的控制，需要多种保护基团操作，难以纯化和放大。

已经描述了寡糖氟化物的酶促合成(Jamie R.Rich,Anna-Maria Cunningham,Michel Gilbert,Stephen G.Withers Chem.Commun.2011,47,10806-10808)。用这种方法，糖链通过糖基转移酶(GT)催化的氟受体的顺序糖基化而构建。这种方法的局限性包括工程化表达和分离纯的酶以及使用昂贵的糖基核苷酸供体。

发明内容

发明人首次建立了用于产生复杂糖基氟化物的生物技术路线。

(1)本发明涉及一种用于产生目的糖基氟化物的方法，该方法包括以下步骤：

a)提供外源性前体和遗传修饰细胞，其中可以在遗传修饰细胞中对外源性前体进行一种或多种糖基化反应，该遗传修饰细胞包含编码一种或多种糖基转移酶的一种或多种核酸序列，并且其中外源性前体是通式I的化合物

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