[发明专利]靶核酸的检测方法

权利要求书

1.一种靶核酸的检测方法，其包含：

将由靶核酸、第一核酸和第二核酸形成的第一开裂结构的第一侧翼切断的步骤；

将由第三核酸、被切断的第一侧翼和第四核酸形成的第二开裂结构的第二侧翼切断的步骤；以及

通过检测被切断的第二侧翼来检测靶核酸的存在的步骤；

其中，将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤通过用侧翼核酸内切酶将所述第一侧翼和所述第二侧翼切断来进行，

所述侧翼核酸内切酶具有与选自由嗜热古生菌(Thermococcus kodakar ensis)KOD1株、深海热球菌(Pyrococcus abyssi)GE5株、以及热自养甲烷嗜热杆菌(Methanothermobacter Thermautotrophicus)Delta H株组成的组中的细菌的侧翼核酸内切酶的氨基酸序列具有96％以上的序列同源性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，

所述靶核酸是DNA。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，

将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在pH为7.5以上且9.0以下的条件下进行。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，

将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在温度为55℃以上且70℃以下的条件下进行。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，

将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在水性溶剂中进行，所述水性溶剂含有Mg²⁺。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，

所述水性溶剂中的Mg²⁺浓度为2.5mM以上且20mM以下。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，

将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在水性溶剂中进行，所述水性溶剂中的K⁺浓度为0mM以上且100mM以下。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，

将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在水性溶剂中进行，所述水性溶剂中的三羟甲基氨基甲烷浓度为超过0mM且300mM以下。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，

将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在水性溶剂中进行，所述水性溶剂中的所述侧翼核酸内切酶浓度为0.5μM以上且8μM以下。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，

将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在水性溶剂中进行，所述水性溶剂的容积为10aL以上且10μL以下。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，

所述第三核酸与所述第四核酸通过连接分子结合。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，

通过检测荧光来检测所述被切断的第二侧翼。

13.一种用于在权利要求1～12中任一项所述的方法中使用的试剂盒，其包含：

所述第三核酸、所述第四核酸、所述侧翼核酸内切酶、以及显示根据所述靶核酸的碱基序列来设计第一核酸和第二核酸的碱基序列的指导的说明书。