[发明专利]CDI增强的新冠肺炎测试

权利要求书

1.一种检测样本中新型冠状病毒、严重急性呼吸综合征-冠状病毒-2(SARS-CoV-2或新冠肺炎)的方法，包括：

a)收集疑似包含新型冠状病毒的样本；

b)使用N2体系分析所述样本的至少第一部分的SARS-CoV-2核衣壳(N)基因中的一个区域；

c)使用(E)体系分析所述样本的至少第二部分进行SARS冠状病毒囊膜(E)基因的通用检测；以及

d)使用人RPP30腺病毒(H-RPP30或RP)体系分析样本的至少第三部分以检测人核糖核酸酶P(RP)；以及

e)组合并评估N2、E和RP体系的结果，以确定是否存在新型冠状病毒。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述N2体系对新型冠状病毒(“nCoV”)是特异性的。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述E体系对所有严重急性呼吸综合征(“SARS”)相关冠状病毒是保守的。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述RP体系是内部对照。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样本采集自鼻咽、口咽、前鼻腔、中鼻甲鼻腔或上呼吸道，或血液、尿液或粪便中的至少一个。

6.一种检测样本中新型冠状病毒、严重急性呼吸综合征冠状病毒-2(SARS-CoV-2或新冠肺炎)的方法，包括：

为多个体系中的每一个制备反应混合物，其中所述体系包括对新型冠状病毒(“nCoV”)具有特异性的第一体系；对严重急性呼吸综合征(“SARS”)相关冠状病毒保守的第二体系；以及作为内部对照的第三体系；

将15μL反应混合物装入多个孔的每个孔中，其中孔由平板分布图定义；

将5μL核糖核酸(“RNA”)添加到平板分布图定义的每个孔中；将所述样本转移到micqPCR循环仪；并运行mic循环仪。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述第一、第二和第三体系分别是N2体系、E体系和RP体系。

8.根据权利要求7所述的方法，其中用于RP体系和N2体系的反应混合物包括(1)2×一步RT-PCR缓冲液III，(2)TaKaRa Ex Taq HS(5U/μl)，(3)PrimeScript RT酶混合物II，(4)无核糖核酸酶蒸馏水，和(5)组合引物/探针混合物。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述用于RP体系和N2体系的反应混合物包括至少10μL/反应的2×一步RT-PCR缓冲液III、0.4μL/反应的TaKaRa Ex Taq HS(5U/μL)、0.4μL/反应的PrimeScript RT酶混合物II、3μL/反应的无核糖核酸酶蒸馏水，以及1.2μL/反应的组合引物/探针混合物。

10.根据权利要求7所述的方法，其中用于E体系的反应混合物包括(1)2×一步RT-PCR缓冲液III，(2)TaKaRa Ex Taq HS(5U/μl)，(3)PrimeScript RT酶混合物II，(4)无核糖核酸酶蒸馏水和(5)E探针混合物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述用于E体系的反应混合物包括至少10μL/反应的2×一步RT-PCR缓冲液III、0.4μL/反应的TaKaRa Ex Taq HS(5U/μL)、0.4μL/反应PrimeScript RT酶混合物II、1.8μL/反应的无核糖核酸酶蒸馏水和2.4μL/反应的E探针混合物。