[发明专利]用于监测多特异性分子的形成物的反相高效液相色谱（RP-HPLC）的系统、材料和方法

权利要求书

1.一种检测多特异性分子的形成物的方法，所述方法包括：

a.获得多特异性分子样品；

b.获得反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱；

c.将所述多特异性分子样品在极性水性流动相A中与所述RP-HPLC柱接触，其中所述极性水性流动相包含离子配对剂；

d.将有机非极性流动相B与所述RP-HPLC柱接触，其中所述有机非极性相包含离子配对剂；

e.洗脱所述多特异性分子样品；以及

f.监测所洗脱的多特异性分子样品中多特异性分子形成物的量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述极性水性流动相A为包含约1％至约5％异丙醇的溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述溶液包含约2％异丙醇。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述极性水性流动相A中的所述离子配对剂选自由三氟乙酸(TFA)、二氟乙酸(DFA)和甲酸(FA)组成的组。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述TFA以约0.1％至约2％存在于所述极性水性流动相A中。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述TFA以约0.1％存在于所述极性水性流动相A中。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机非极性流动相B为包含约60％至约80％异丙醇和约15％至约25％乙腈的溶液。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述溶液包含约70％异丙醇。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述溶液包含约20％乙腈。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述有机非极性流动相B中的所述离子配对剂选自由三氟乙酸(TFA)、二氟乙酸(DFA)和甲酸(FA)组成的组。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述TFA以约0.1％至约2％存在于所述有机非极性水性流动相B中。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述TFA以约0.1％存在于所述有机非极性水性流动相B中。

13.一种在执行用以产生多特异性抗体的制造过程的同时检测多特异性抗体的形成物的方法，所述方法包括：

a.执行用以产生多特异性抗体的制造过程，其中所述制造过程产生包含一定量的多特异性抗体的多特异性抗体样品；

b.搭建反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱；

c.将所述多特异性分子样品在极性水性流动相A中注入所述RP-HPLC柱中，其中所述极性水性流动相包含离子配对剂；

d.将有机非极性流动相B施加到所述RP-HPLC柱以形成梯度洗脱，其中所述有机非极性流动相包含离子配对剂；

e.洗脱所述多特异性抗体样品；以及

f.监测所洗脱的样品中多特异性抗体形成物的量。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述极性水性流动相A为包含约1％至约5％异丙醇的溶液。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述溶液包含约2％异丙醇。

16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述极性水性流动相A中的所述离子配对剂选自由三氟乙酸(TFA)、二氟乙酸(DFA)和甲酸(FA)组成的组。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述TFA以约0.1％至约2％存在于所述极性水性流动相A中。