[发明专利]用于监测多特异性分子的形成物的反相高效液相色谱（RP-HPLC）的系统、材料和方法

说明书

本文提供了用于在多特异性分子制造或开发过程之后检测多特异性分子形成物的高压液相色谱(HPLC)方法。HPLC方法提供对多特异性分子形成物的快速、定量、实时处理。

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年4月16日提交的美国临时申请序列号63/010,907、 63/010,912、63/010,920和63/010,926的权益。上述申请的全部内容全文以引用方式并入本文。

技术领域

本发明涉及一种用于在多特异性分子制造或开发过程之后检测多特异性分子形成物的高压液相色谱(HPLC)方法。HPLC方法提供了对多特异性分子形成物的快速、定量、实时处理。

背景技术

在多特异性分子(例如，多特异性抗体)的制造或过程研究与开发 (RD)期间，无论制造过程如何，多特异性分子(例如，多特异性抗体)的不完整形成物的可能性都仍然存在。先前已采用非还原毛细管十二烷基硫酸钠(NR-cSDS)来监测不完整的多特异性抗体形成物；然而，该技术无法提供在过程制造环境中研究多特异性形成物时或在多特异性分子(例如，多特异性抗体)开发期间所需的快速、定量、实时结果。因此，需要一种快速、定量、实时的监测多特异性分子(例如，多特异性抗体) 形成物的过程。

发明内容

本文提供了检测多特异性分子的形成物的方法。所述方法包括：(a)获得多特异性分子样品；(b)获得反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱；(c)将多特异性分子样品在极性水性流动相A中与RP-HPLC柱接触，其中极性水性流动相包含离子配对剂；(d)将有机非极性流动相B与RP-HPLC柱接触，其中有机非极性相包含离子配对剂；(e)洗脱该多特异性分子样品；以及(f) 监测所洗脱的多特异性分子样品中多特异性分子形成物的量。在某些实施方案中，多特异性分子为多特异性抗体。

本文还提供了在执行用以产生多特异性抗体的制造过程的同时检测多特异性抗体的形成物的方法。所述方法包括：(a)执行用以产生多特异性抗体的制造过程，其中该制造过程产生包含一定量的多特异性抗体的多特异性抗体样品；(b)搭建反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱；(c)将多特异性分子样品在极性水性流动相A中注入RP-HPLC柱中，其中极性水性流动相包含离子配对剂；(d)将有机非极性流动相B施加到RP-HPLC柱以形成梯度洗脱，其中有机非极性流动相包含离子配对剂；(e)洗脱该多特异性抗体样品；以及(f)监测所洗脱的样品中多特异性抗体形成物的量。

本文还提供了在执行用以产生双特异性抗体的受控FAB臂交换 (cFAE)的同时检测双特异性抗体的形成物的方法。所述方法包括：(a)执行用以产生cFAE样品的受控FAB臂交换(cFAE)，其中cFAE样品包含一定量的双特异性抗体；(b)搭建反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱；(c)将 cFAE样品在极性水性流动相A中注入RP-HPLC柱中，其中极性水性流动相包含离子配对剂；(d)将有机非极性流动相B施加到RP-HPLC柱以形成梯度洗脱，其中有机非极性流动相包含离子配对剂；(e)洗脱该cFAE样品；以及(f)监测所洗脱的样品中双特异性抗体形成物的量。

还提供了设计稳定的多特异性抗体的方法。所述方法包括：(a)执行用以产生多特异性抗体的制造过程，其中该制造过程产生包含一定量的多特异性抗体的多特异性抗体样品；(b)搭建反相高效液相色谱(RP-HPLC) 柱；(c)将多特异性分子样品在极性水性流动相A中注入RP-HPLC柱中，其中极性水性流动相包含离子配对剂；(d)将有机非极性流动相B施加到 RP-HPLC柱以形成梯度洗脱，其中有机非极性流动相包含离子配对剂；(e) 洗脱该多特异性抗体样品；以及(f)监测所洗脱的样品中多特异性抗体形成物的量，其中与对照相比，多特异性抗体形成物的增加的量指示稳定的多特异性抗体的设计。