[发明专利]用于表征流式细胞仪数据中的溢出扩散的方法和系统

说明书

提供了表征在针对第二荧光染料收集的荧光流式细胞仪数据中源自第一荧光染料的溢出扩散的方法。在一些实施例中，方法包括根据数据相对于第一荧光染料的强度来划分荧光流式细胞仪数据。在实施例中，方法还包括基于从第一荧光染料收集的光的强度为零的假设，通过第一线性回归针对所划分的分位点中的每一个估计从第二荧光染料收集的光的强度的调零的标准偏差，以及通过第二线性回归从调零的标准偏差获得溢出扩散系数。还提供了用于表征在针对第二荧光染料收集的荧光流式细胞仪数据中源自第一荧光染料的溢出扩散的系统和计算机可读介质。

交叉引用

根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2020年5月6日提交的美国临时专利申请第63/020,758号和2020年9月10日提交的美国临时专利申请第63/076,611号的优先权，所述申请的公开内容通过引用全部并入本文。

前言

流式细胞术是用于表征生物材料(例如血液样本的细胞或另一种类型的生物样本或化学样本中的感兴趣的粒子)并通常对生物材料进行分选的技术。流式细胞仪通常包括用于接收流体样本(例如血液样本)的样本储存器和包含鞘液的鞘储存器。流式细胞仪将流体样本中的粒子(包括细胞)作为细胞流传输至流动池，同时也将鞘液引导至流动池。为了表征流动流的成分，流动流被光照射。流动流中材料的变化，例如形态或荧光标记的存在，可能会引起观察到的光的变化，并且这些变化允许表征和分离。例如，流体悬浮液中的粒子(例如分子、分析物结合珠或单个细胞)穿过检测区域，在该检测区域中粒子暴露于激发光(通常来自一个或更多个激光器)，并且粒子的光散射和荧光特性被测量。粒子或其成分通常用荧光染料标记以便于检测。通过使用光谱上不同的荧光染料来标记不同的粒子或成分，可以同时检测多种不同的粒子和成分。在一些实施方式中，分析仪中包括多个检测器，对于待测量的每个散射参数有一个检测器，并且对于待检测的每种不同的染料有一个或更多个检测器。例如，一些实施例包括光谱配置，其中每种染料使用多于一个传感器或检测器。获得的数据包括针对每个光散射检测器和荧光发射所测量的信号。

流式细胞仪还可以包括用于记录测量的数据和分析数据的装置。例如，可以使用连接到检测电子设备的计算机执行数据存储和分析。例如，数据能够以表格形式存储，其中每行对应于一个粒子的数据，并且列对应于每种测量的特征。使用标准文件格式(如“FCS”文件格式)存储来自粒子分析仪的数据有助于使用单独的程序和/或机器分析数据。使用当前的分析方法，数据通常以一维直方图或二维(2D)图表显示以便于可视化，但也可以使用其他方法来可视化多维数据。

使用流式细胞仪测量的参数通常包括由粒子主要沿向前方向以窄角度散射的激发波长处的光(称为前向散射(FSC))，由粒子沿与激发激光器正交的方向散射的激发光(称为侧向散射(SSC))，以及从在光谱波长范围内测量信号的一个或更多个检测器中的荧光分子发射的光或由在该特定检测器或检测器的阵列中主要检测到的荧光染料发射的光。不同的细胞类型能够通过其光散射特性和荧光发射来识别，所述荧光发射是通过用荧光染料标记的抗体或其他荧光探针标记各种细胞蛋白或其他成分而产生的。