[发明专利]使用已敲除CEL1A基因的木霉属真菌菌株生产蛋白质的方法

权利要求书

1.一种通过其中cel1a基因已被敲除的属于木霉属的真菌菌株生产蛋白质的方法，包括至少两个步骤：

-第一步：在至少一种碳生长底物存在下在分批阶段中生长，和

-第二步：在包含至少乳糖和第二种糖的组合物的存在下，在分批补料阶段生产蛋白质，所述组合物中的乳糖含量占所述组合物中总糖含量的约0至30重量％，特别是5至30重量％。

2.根据前述权利要求所述的方法，其中所述组合物中的乳糖含量为大于所述组合物中总糖含量的0重量％至5重量％，或为大于所述组合物中总糖含量的5重量％至小于10重量％，或为所述组合物中总糖含量的10重量％至至多20重量％。

3.根据权利要求1至2中所述的生产蛋白质的方法，其中所述真菌属于里氏木霉物种。

4.根据前述权利要求中任一项所述的生产蛋白质的方法，其中所述蛋白质是酶，特别是纤维素分解酶，例如纤维素酶或半纤维素酶。

5.根据前述权利要求中任一项所述的生产蛋白质的方法，其中所述第二种糖选自葡萄糖或木糖，优选葡萄糖。

6.根据前述权利要求中任一项所述的生产蛋白质的方法，其中所述组合物中的乳糖含量占所述组合物中总糖含量的约10至20重量％。

7.根据前述权利要求中任一项所述的生产蛋白质的方法，其中所述组合物包含：

-约70-95重量％的葡萄糖和/或木糖，和

-约5-30重量％的乳糖。

8.根据前述权利要求中任一项所述的生产蛋白质的方法，其中所述组合物包含：

-约80-90重量％的葡萄糖和/或木糖，和

-约10-20重量％的乳糖，

并且更具体地

-约80-90重量％的葡萄糖，和

-约10-20重量％的乳糖。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的生产蛋白质的方法，其中：

-所述组合物包含约90-95重量％的水溶性戊糖的粗提物和葡萄糖和5-10重量％的乳糖，或

-所述组合物中的糖含量由100％的水溶性戊糖的粗提物和葡萄糖组成。

10.根据前述权利要求中任一项所述的生产蛋白质的方法，其中所述第二种糖选自葡萄糖、木糖、纤维素生物质的酶促水解产物的单糖在乙醇发酵后获得的液体残渣，可选地在乙醇发酵然后蒸馏之后获得、源自纤维素生物质预处理的水溶性戊糖的粗提物、木质纤维素的酶促水解产物和/或淀粉质生物质的水解产物。

11.根据前述权利要求中任一项所述的生产蛋白质的方法，其中已通过诱变或通过同源重组在所述真菌菌株中敲除cel1a基因，特别是使用如SEQ ID NO:3所示的敲除盒。

12.一种从纤维素或木质纤维素底物生产糖的方法，包括以下步骤：在包含至少乳糖和第二种糖的组合物的存在下，通过其中cel1a基因已被敲除的属于木霉属的真菌菌株生产纤维素分解酶，所述组合物中的乳糖含量占所述组合物中总糖含量的约0至30重量％，特别是5至30重量％。

13.一种从纤维素或木质纤维素底物生产生物基产品的方法，包括以下步骤：在包含至少乳糖和第二种糖的组合物的存在下，通过其中cel1a基因已被敲除的属于木霉属的真菌菌株生产纤维素分解酶，所述组合物中的乳糖含量占所述组合物中总糖含量的约0至30重量％，特别是5至30重量％。

14.一种从纤维素或木质纤维素底物生产醇，特别是乙醇的方法，包括以下步骤：在包含至少乳糖和第二种糖的组合物的存在下，通过其中cel1a基因已被敲除的属于木霉属的真菌菌株生产纤维素分解酶，所述组合物中的乳糖含量占所述组合物中总糖含量的约0至30重量％，特别是5至30重量％。