[发明专利]在蛋白质纯化过程中降低宿主细胞蛋白质含量的方法

权利要求书

1.一种降低包含在宿主细胞中重组地产生的目的蛋白质的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质的含量的方法，所述方法包括以下步骤：

a.使蛋白质制剂经过亲和层析柱；

b.用由弱酸和强酸组成的酸组合从层析柱中洗脱目的蛋白质，以获得包含目的蛋白质的洗脱液；

c.将洗脱液的pH值提高到约6.0以上；及

d.将洗脱液进行深度过滤，获得经过滤的蛋白质制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述层析柱包括蛋白A、蛋白G或蛋白L亲和层析柱。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述弱酸有不多于一个小于7.0的pKa值，并且所述强酸有不多于一个小于7.0的pKa值。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述弱酸是乙酸，所述强酸是磷酸或乳酸。

5.根据权利要求4所述的方法，其中乙酸的浓度为约20mM，并且其中所述强酸是磷酸，以及其中磷酸的浓度为约5mM至约10mM。

6.根据权利要求4所述的方法，其中乙酸的浓度为约20mM，并且中所述强酸是乳酸，以及其中乳酸的浓度为约5mM。

7.根据权利要求1所述的方法，进一步包括进行病毒灭活的步骤。

8.根据权利要求1所述的方法，进一步包括进行病毒灭活的步骤，其包括调整来自所述的从层析柱上洗脱蛋白质的步骤的洗脱液的pH值至约4.0以下，并且其中洗脱液在约pH4.0以下的状态下维持约0分钟至约180分钟。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述调整洗脱液的pH值的步骤包括将洗脱液的pH值调整到约pH 3.3至约pH 3.7。

10.根据权利要求9所述的方法，其中调整洗脱液的pH值至约pH 3.5。

11.根据权利要求8至10中任一项所述的方法，其中调整洗脱液的pH值包括加入HCl、磷酸或乙酸和磷酸的组合中的任一种。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述提高洗脱液的pH值的步骤包括将pH值提高到约pH 6.5至约pH 7.5。

13.根据权利要求12所述的方法，其中提高洗脱液的pH值至约pH 7.0。

14.根据权利要求12或13中任一项所述的方法，其中提高洗脱液的pH值的步骤包括添加Tris。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中在所述将pH值提高至约6.0以上的步骤中，洗脱液具有约10mM至约45mM的离子强度。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，进一步包括将经深度过滤的蛋白质制剂进行离子交换层析的步骤。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中经过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质的含量被降低至低于100ppm。

18.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中经过滤的蛋白制剂中的宿主细胞蛋白质的含量包括PLBL2，并且其中PLBL2被降低至低于100ppm。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述蛋白质制剂包括收获的细胞培养液、捕获池或回收的蛋白池。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是治疗性或诊断性蛋白质。