[发明专利]在蛋白质纯化过程中降低宿主细胞蛋白质含量的方法

说明书

本公开涉及用于在将要施用给患者的蛋白质的制备过程中降低在宿主细胞中重组地产生的蛋白质制剂中宿主细胞蛋白质含量的方法。

本发明涉及重组蛋白质制备领域。更具体地，本发明提供了一种用于在将要给病人施用的蛋白质(诸如治疗性或诊断性蛋白质)的制备过程中降低包含在宿主细胞中重组地生产的目的蛋白质的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法目的蛋白质。

宿主细胞蛋白质(HCP)是参与细胞的维持和生长及蛋白质的合成和加工的宿主细胞的蛋白质。然而，在治疗性或诊断性蛋白质领域，HCP的存在威胁着产品质量和病人安全，因为它会造成诸如聚集、产品因催化活性和/或免疫原性而碎片化等问题。因此，HCP被视为蛋白质制剂的一个关键质量属性(CQA)。不希望的聚集和产品碎片化的形成要求通过额外的纯化步骤来降低/去除HCP，而这些额外的纯化步骤经常会导致目标蛋白质的产量减少和整体制造制备的增加。

从制备过程中消除HCP的挑战，以及改进工艺以降低HCP的尝试已经公开，例如在以下资料中所述的，Gilgunn等；Goey等,Biotechnology Advances 36(2018)1223–1237；以及Current Opinion in Chemical Engineering 2018,22:98–

106.。然而，这些去除HCP的工艺都存在局限性。例如，在某些情况下，这些公开的资料显示了HCP的不完全去除、去除HCP中的工艺不一致导致聚集、想要的蛋白质和HCP的共纯化、产品功能受损、患者的免疫原性问题，和/或削减的药代动力学性质诸如半衰期中的一种或多种。此外，为去除HCP而开发的工艺经常要求例如需要在增加的体积及额外的纯化步骤下操作，常导致制备成本增加及产量减少。在某些情况下，该方法的适用性仅限于特定的分子和/或形式。因此，在治疗性或诊断性蛋白质的纯化过程中，仍需要可用于降低HCP的替代方法。此类替代方法优选在不影响产品稳定性、产量或成本的情况下降低HCP以最终保持产品质量，并可用于大规模制备和确保病人安全。

因此，本发明通过提供在制备治疗性或诊断性蛋白质时降低HCP的替代方法来解决上述一或多个问题。本发明的方法提供了可复现的方法，其在去除HCP方面非常有效，同时保持蛋白质的稳定性，减少聚集，维持产品产量，并有降低免疫原性风险的潜力。此类方法可以有效地去除HCP而不要求增加蛋白质的制备体积。令人惊讶地，本发明的方法实现了HCP计量远低于行业100ppm的可接受的标准。令人惊讶地，在实施方案中，本发明的方法实现了HCP计量50ppm且同时保持了蛋白质的稳定性，减少了聚集，维持了产品产量。更令人惊讶地，本发明的其它实施方案实现了HCP计量20ppm且同时保持了蛋白质的稳定性，减少了聚集，维持了产品产量。此外，本发明的实施方案提供的HCP去除方法适用于广泛的分子。本发明的其他实施方案能够消除额外的纯化步骤，从而减少批量处理时间，并降低制备成本。

因此，特定的实施方案提供了一种降低包含在宿主细胞中重组地产生的目的蛋白质的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，所述方法包括，使在宿主细胞中重组地产生的蛋白质制剂经过亲和层析柱，用由一种弱酸和一种强酸组成的酸组合从层析柱中洗脱目的蛋白质，以获得包含目的蛋白质的洗脱液，将洗脱液的pH值提高至约6.0以上，将洗脱液进行深度过滤，并获得经过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自pH值提高至约6.0以上的步骤的洗脱液的离子强度为约10mM至45mM。在一些实施方案中，弱酸具有不多于一个小于7.0的pKa值，强酸具有不多于一个小于7.0的pKa值。优选经过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量降低。更优选经过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量降低至低于约100ppm，低于约50ppm，或低于约20ppm。