[发明专利]基因多态性检测方法

说明书

本发明的主要课题在于，提供迅速且对被检者的侵入性低的ApoE基因多态性的新的检测方法。作为本发明，可列举例如：一种基因多态性检测方法，其用于检测采自被检者的基因组DNA中存在的载脂蛋白E的基因多态性，所述方法包括下述的步骤1～3。步骤1：制作使DNA从唾液游离而成的被检体；步骤2：向包含该DNA的被检体中添加(1)PCR酶、(2)用于扩增载脂蛋白E基因的核酸片段的PCR引物对、以及(3)具有用于检测载脂蛋白E的基因多态性的寡核苷酸的荧光标记探针组并进行混合；和，步骤3：进行PCR，从其PCR产物测定与载脂蛋白E的基因多态性对应的荧光强度。

技术领域

本发明属于基因多态性检测方法的技术领域。本发明涉及检测载脂蛋白E(以下也称为“ApoE”。)基因的多态性的方法。详细而言，本发明涉及由唾液等外分泌液检测ApoE基因多态性的方法。

背景技术

ApoE是由299个氨基酸构成的分子量34200Da的蛋白质。其ApoE基因有ε2、ε3和ε4等位基因(allele)，存在由各基因编码的3种主要异形体ApoE2、ApoE3、ApoE4。这些的第112位和第158位这2个位点的氨基酸残基不同，ApoE2中为Cys/Cys，ApoE3中为Cys/Arg，ApoE4中为Arg/Arg。这些中，第112位的氨基酸残基为Cys、第158位的氨基酸残基为Arg的ApoE3为野生型，频率最高。ApoE2和ApoE4为突变型。

ApoE是与胆固醇运载、脂蛋白代谢等脂质代谢相关的分子，参与肝脏脂肪酶、脂蛋白脂肪酶、卵磷脂-胆固醇酰基转移酶等脂质代谢酶的活化。

与阿尔茨海默型痴呆症(AD)的发病、认知功能障碍(MCI等)相关的风险基因已经报道了很多，其中，ApoE是风险最高的基因。并且，在高龄发病AD中，已确认ApoE4的频率高，报道了ApoE2的频率低。进而还已知，在女性的情况下，在低龄发病型、高龄发病型中ApoE4的频率大致相同，而在男性的情况下，高龄发病型的ApoE4的频率高于低龄发病型，ApoE4/4会使AD的发病年龄提前5～10岁左右，具有ApoE4/4的AD患者对AD治疗药的反应性差且糖代谢率也低，脑萎缩容易按照ApoE4/4、ApoE3/4、ApoE3/3的顺序进展等。

另外还已知，在此外的属于痴呆症的血管性痴呆症(VD)、路易体痴呆等情况下ApoE4的频率高，在脑淀粉样血管病所致的脑出血患者中ApoE2的频率高，等。

而且，据报道在帕金森病、精神分裂症、抑郁症、焦虑症、癫痫之类的精神神经疾病中ApoE4的频率高。

如上所述，可认为ApoE基因多态性是获知AD等的发病风险的重要因子。

以往在进行AD的发病诊断、预测时，通常由例如MRI(Magnetic ResonanceImaging：磁共振图像诊断装置)、CT(Computed Tomography，电子计算机断层扫描)的图像来判断。但是，拍摄MRI图像需要一定时间，患者的负担也大。因此，正在研究能够更迅速地进行判定的、使用ApoE基因多态性的信息的AD发病诊断/预测方法。

以往的ApoE基因多态性的测定通常是采自被检者血液来进行的。例如，专利文献1公开了检测血液样品中的ApoE4或其片段的方法。非专利文献1中使用实时PCR检测了ApoE基因多态性。这样的将血液作为样品来检测ApoE基因多态性的方法的问题在于侵入性高、被检者的负担依然大。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本特表2019-536007号公报

非专利文献

非专利文献1:Clinical Chemistry 45，No.7，1999，pp.1094-1097

发明内容

发明要解决的问题