[发明专利]使用基于毛细管的免疫测定系统进行的用于糖缀合物的分析方法

权利要求书

1.一种用于分析测试样品中的糖缀合物的方法，所述测试样品包含至少4种糖缀合物的混合物，

其中所述分析包括：

●鉴定所述糖缀合物，以及

●基于校准曲线绝对定量所述糖缀合物；

其中所述方法包括以下步骤：

(a)提供所述测试样品和一组校准样品、任选的阶梯样品和任选的对照样品；

(b)借助于基于毛细管的免疫测定系统在各个毛细管中测量：所述测试样品、所述校准样品、任选的所述阶梯样品和任选的所述对照样品，从而产生每个毛细管的数据集；以及

(c)借助于计算机程序分析所述数据集，所述计算机程序至少提供以下功能：

●接收积分限制；以及

●计算每个毛细管的背景信号；以及

●从在每个毛细管中产生的信号中减去背景信号。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖缀合物的测量产生宽信号，特别是包含未完全分辨的峰的宽信号。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述糖缀合物是糖缀合物疫苗的组分。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述糖缀合物是生物缀合物，特别是通过优选地在大肠杆菌中使用PglB寡糖基转移酶系统将多糖组分酶促缀合到载体蛋白而产生的生物缀合物。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述糖缀合物包含一种载体蛋白和与所述载体蛋白共价结合的一种或多种多糖，其中

(i)所述载体蛋白是铜绿假单胞菌的脱毒外毒素A(EPA)，并且

(ii)所述多糖是选自由O1A、O2、O4、O6A、O8、O15、O16、O18A、O25B或O75组成的组的大肠杆菌O-抗原。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述多糖包含1-100个、优选3-30个、更优选5-20个重复单元，所述重复单元包含未修饰的单糖和/或修饰的单糖，所述修饰的单糖特别是O-乙酰化单糖和/或N-乙酰化单糖。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述测试样品还包含：

●水性基质，所述基质任选地包括缓冲剂、无机盐、糖醇和/或非离子表面活性剂中的一种或多种；

●任选的未与载体蛋白结合的多糖(“游离PS”)；

●任选的非相关蛋白。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述测试样品包含多种不同的糖缀合物，优选4-20种糖缀合物，优选4-10种糖缀合物，诸如4、9或10种糖缀合物，所述糖缀合物在权利要求5(ii)中所列的多糖组分方面不同。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述分析包括

●鉴定所述糖缀合物的单糖基化变体、二糖基化变体、三糖基化变体和/或四糖基化变体，以及/或者

●基于校准曲线来绝对定量所述糖缀合物的单糖基化变体、二糖基化变体、三糖基化变体和/或四糖基化变体。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述步骤a)还包括以下步骤中的一个或多个，优选地按所指示的顺序：

(a1)将所述糖缀合物的浓度调节至0.01μg mL^-1–0.50μgmL^-1的预期浓度；

(a2)向所述样品中添加一种或多种辅助试剂，所述辅助试剂选自样品缓冲剂、二硫桥还原剂和一种或多种标记物；

(a3)使所述样品变性，优选地通过加热进行。