[发明专利]利用CRISPR/Cas9系统的褐变抑制马铃薯植株的制备方法在审
| 申请号： | 202180079490.7 | 申请日： | 2021-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN116615535A | 公开（公告）日： | 2023-08-18 |
| 发明（设计）人： | 权纯一;韩智学;李叡琳;金芭琳 | 申请（专利权）人： | 株式会社图尔金 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 安玉;蒋洪之 |
| 地址： | 韩国*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 crispr cas9 系统 抑制 马铃薯 植株 制备 方法 | ||
1.一种用于抑制马铃薯植株褐变的基因组编辑用组合物，其特征在于，包含如下成分作为有效成分：
对马铃薯来源的马铃薯多酚氧化酶2基因的靶碱基序列具有特异性的向导RNA和核酸内切酶蛋白的复合物；或者
重组载体，包含编码对马铃薯来源的马铃薯多酚氧化酶2基因的靶碱基序列具有特异性的向导RNA的DNA及编码核酸内切酶蛋白的核酸序列。
2.根据权利要求1所述的用于抑制马铃薯植株褐变的基因组编辑用组合物，其特征在于，上述马铃薯多酚氧化酶2基因的靶碱基序列由序列号5的碱基序列组成。
3.一种向导核酸，其特征在于，
上述向导核酸为在构成马铃薯多酚氧化酶2基因的核苷酸序列中对靶区域具有特异性的RNA序列，
上述靶区域为序列号5的碱基序列。
4.一种褐变得到抑制的基因组编辑马铃薯植株的制备方法，其特征在于，包括：
步骤(a)，通过将对马铃薯来源的马铃薯多酚氧化酶2基因的靶碱基序列具有特异性的向导RNA及核酸内切酶蛋白引入马铃薯植物细胞中来编辑基因组；以及
步骤(b)，从上述基因组被编辑的马铃薯植物细胞再生马铃薯植株。
5.根据权利要求4所述的褐变得到抑制的基因组编辑马铃薯植株的制备方法，其特征在于，使用如下成分将上述步骤(a)的向导RNA及核酸内切酶蛋白引入马铃薯植物细胞中：
对马铃薯来源的马铃薯多酚氧化酶2基因的靶碱基序列具有特异性的向导RNA和核酸内切酶蛋白的复合物；或者
重组载体，包含编码对马铃薯来源的马铃薯多酚氧化酶2基因的靶碱基序列具有特异性的向导RNA的DNA及编码核酸内切酶蛋白的核酸序列。
6.根据权利要求4所述的褐变得到抑制的基因组编辑马铃薯植株的制备方法，其特征在于，上述马铃薯多酚氧化酶2基因的靶碱基序列由序列号5的碱基序列组成。
7.根据权利要求4所述的褐变得到抑制的基因组编辑马铃薯植株的制备方法，其特征在于，上述步骤(b)的基因组被编辑的马铃薯植物细胞在马铃薯多酚氧化酶2基因的靶碱基序列中被诱导产生1～10bp大小的缺失变异。
8.一种褐变得到抑制的基因组编辑马铃薯植株，其特征在于，通过权利要求4至7中任一项所述的方法制备。
9.根据权利要求8所述的基因组编辑马铃薯植株，其特征在于，上述褐变得到抑制的基因组编辑马铃薯植株在马铃薯多酚氧化酶2基因的靶碱基序列中被诱导产生1～10bp大小的缺失变异。
10.一种种薯，其特征在于，权利要求8所述的马铃薯植株的基因组被编辑。
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