[发明专利]一种检测寨卡病毒非结构蛋白NS1的ELISA试剂盒

说明书

本发明提供一种用于检测寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)非结构蛋白NS1的ELISA试剂盒，该试剂盒包括捕获抗体和与标记物结合的检测抗体，其特征在于所述的捕获抗体由NS1特异性重组抗原筛选得到，所述的检测抗体的标记物可以是生物素、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、胶体金或荧光素。该试剂盒能特异性的检测寨卡病毒的NS1蛋白，与其他黄病毒属病毒，如西尼罗河病毒、登革病毒和乙型脑炎病毒无交叉反应，可对寨卡病毒进行早期体外诊断，且其灵敏度比国外商品化试剂盒检测的灵敏度至少高出倍，可有效降低了临床应用中的漏检现象。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测寨卡病毒非结构蛋白NS1的ELISA试剂盒以及NS1特异性抗原的筛选。

背景技术

寨卡病毒(Zika Virus,ZIKV)第一次发现于1947年，却一直未得到广泛的关注。直到2015年，巴西突然爆发了大规模的婴儿头小畸形病例(microcephaly)，并且数量不断增加，才引起了人们的关注，到2016年2月29日，巴西至少150万人感染了寨卡病毒。ZIKV为人类健康、后代生存、经济发展带来了严重危害，然而到目前为止，在世界范围内还没有切实有效的能用于临床上治疗ZIKV感染的疫苗或特效药物。但实践表明及时采取临床救治措施可以大大减少寨卡病毒的发病率和死亡率，因此寨卡病毒的治疗很大程度上取决于早期感染的诊断。

目前，寨卡病毒的实验室诊断方法主要包括病毒分离、血清学检测和核酸检测，其中病毒分离是登革病毒感染诊断和血清型鉴定的金标准，但由于寨卡病毒分离和基因诊断受到标本采集时间的限制，同时对设备、实验室条件及人员素质要求很高，不利于推广。寨卡病毒核酸的检测方法比传统的病毒分离法更灵敏、快速，但分子诊断操作相对繁琐，对技术水平要求较高，并较易发生污染导致假阳性结果，同时由于毒株变异、潜在突变等序列改变也可能引起假阴性结果。传统的血清学方法主要包括血凝抑制实验、补体结合实验、中和实验和免疫荧光法。但这些方法大多敏感性和特异性不高，特别是接种乙型脑炎病毒、黄热病毒等疫苗的人群易发生抗体假阳性反应结果，且操作繁烦，有的需要特殊检测设备，目前已较少应用。因此，建立一种快速、可靠、标准化的寨卡病毒早期诊断方法显得非常必要，将会对发现、控制传染源，对于控制疫情起着至关重要的作用。

寨卡病毒RNA基因组的单个开放阅读框可编码一个多聚蛋白，并被蛋白酶切割成三个结构蛋白和七个非结构蛋白。N端编码的三个结构蛋白分别C-prM-E，而基因组C端编码的七个非结构蛋白则依次是NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5。其中NS1是一种重要的非结构蛋白，它在病毒的胞内复制过程中起到了重要作用。所有黄病毒属的NS1具有高度同源性，均含有352aa，根据其糖基化的不同状态分子量大致为46-55kDa。NS1存在不同的聚合状态并定位于细胞内不同位置，有的是与细胞膜相互作用的NS1(membran e-associatedform of NS1，mNS1)，位于细胞内的囊泡中或者细胞表面；有的作为富含脂类的形式分泌到胞外(secreted form of NS1，sNS1)。分泌到胞外NS1使得感染者血液中的NS1含量很高，也就是意味着它是一种寨卡病毒早期感染的一种重要标志物。如果能够制备出特异性的NS1抗体，理论上可以在早期顺利检测到被寨卡病毒感染的患者。且ELISA法具有较高的敏感性和特异性，且操作简便快速，是目前大多数实验室采用的主要方法。

发明内容

针对相关技术中的问题，本发明提供一种检测寨卡病毒非结构蛋白NS1的ELISA试剂盒,该试剂盒包括捕获抗体和与标记物结合的检测抗体。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

(1)特异性抗原的筛选与设计

分析寨卡病毒非结构蛋白NS1目的抗原序列，筛选出特异性高和抗原性强的几个肽段，所选多肽如下所示：

Pep1：VKNPMWRGPQRLPV；

Pep2：VREDYSLECDPAV；