[发明专利]墨兰×春兰杂交兰后代根状茎分化成苗的方法

说明书

本发明公开了一种墨兰×春兰杂交兰后代根状茎分化成苗的方法，包括以下步骤：1)、选择经墨兰×春兰杂交后代种子无菌萌发形成的根状茎并增殖培养获得的根状茎；2)、将步骤1)所得的根状茎切割成1～1.5cm长，平放在分化培养基上，置于培养室黑暗培养；获得带有圆锥形芽点的根状茎段；3)、将步骤2)所得的带有圆锥形芽点的根状茎段转入光照培养条件下培养。本发明以墨兰和春兰杂交种子经无菌萌发形成的根状茎为试验材料，通过其适宜的培养条件，获得较高的成苗率，且根状茎只分化成苗而不增殖，既解决了根状茎成苗率低，又解决了在分化成苗同时进行大量增殖的烦恼。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种墨兰×春兰杂交后代根状茎分化成苗的方法。

背景技术

中国兰花高雅幽香，具有很高的观赏和经济价值，同时也具有悠久的栽培历史，逐渐形成了独特的兰花文化。但中国兰花品种改良进程缓慢，主要的育种手段仍为传统的系统选育，为加快兰花育种进程，高校、科研院所甚至一些公司都开始开展中国兰杂交育种，由于国兰种子无胚乳，自然条件掉落土壤萌发率极低且所需时间长，借助组织培养等生物技术手段则可以加快杂交后代的选育，而组织培养中国兰或其杂交后代必经的发育阶段根状茎能否高频成苗则是兰花杂交育种和组织培养产业化的“卡脖子”问题，且不同的国兰品种以及杂交后代根状茎的分化能力也存在较大的差异。

CN110338059A公开了一种提高国兰根状茎增殖和分化效率的方法，该发明公开了在常规公开的国兰增殖培养基中添加适当浓度的硫酸铜能显著提高根状茎增殖率和分化率，添加6mg·L^-1硫酸铜，“玉香兰”根状茎芽分化率为85.63％，平均每条根状茎(1cm左右)分化芽数1.01±0.02个，添加2mg·L^-1硫酸铜，“达摩”墨兰平均每g芽分化数22.4个，成苗率25.42％。总体根状茎分化成苗率偏低，不利于国兰组培产业化发展。

CN110313401A公开了一种促进企剑白墨墨兰组织培养过程中芽分化的方法，该发明公开了在芽分化培养基中同时添加6-BA和Yucasin，促进了激素相关基因的表达并引起内源激素微环境的改变，从而促进企剑白墨墨兰根状茎的芽分化，但未描述其根状茎芽分化率达到多少。

CN105875410A公开了一种墨兰与虎头兰的杂交兰种苗的快速繁殖方法，以墨兰与虎头兰的杂交兰无菌苗基部组织为材料，在含有多种植物生长调节剂和附加物的诱导培养基中进行诱导培养获得原球茎，将获得的原球茎进行增殖与分化培养，再进行壮苗、生根，移栽。增殖与分化培养基包括：MS基本培养基，6-苄氨基腺嘌呤2.0～3.0mg/L，激动素0.2～0.5mg/L，萘乙酸0.5～1.0mg/L，水解酪蛋白0.5～1.5g/L，活性炭0.1～0.5g/L，蔗糖30～40g/L和琼脂粉5.5～6.5g/L，pH＝5.4～5.8。

需要说明的是：CN105875410A涉及的是原球茎，准确地讲是类原球茎。在兰花领域，原球茎是指由兰科植物种子萌发形成的球形或椭圆形的结构(詹忠根等，兰科植物原球茎(类原球茎)的形态建成，2002)。由兰科植物茎尖、叶片、根尖、茎节切断及花序枝通过组织培养后形成的类似原球茎的结构，称为类原球茎(詹忠根等，兰科植物原球茎(类原球茎)的形态建成，2002)。兰花种子在无菌培养萌发过程中的形态发生也存在差异。附生兰的种子萌发初始形成白色的圆球形的原球茎，随着原球茎体积的增大其上出现毛状假根继而原球茎体转为绿色，但原球茎不伸长，在原球茎顶端出现芽，长大分化出茎和叶，因此原球茎是附生兰组织培养中主要的发育阶段且是用于大量增殖的材料；地生兰的种子萌发时种子中的胚突破种皮后，开始呈白色圆球形，但很快就伸长形成长柱形成为地下茎或根状茎，在根状茎表面有间隔地长出一丛丛毛状假根根状茎的顶芽分化出芽(王卜琼等，2006)，因此根状茎是地生兰组织培养中主要的发育阶段且是用于大量增殖的材料。且墨兰属于兰属建兰亚属建兰组，是地生兰，虎头兰属于兰属大花亚属大花组，是附生兰。按该专利的说明两者的杂交后代更倾向于附生兰，因此是通过原球茎进行增殖和分化的。

而，墨兰和春兰都属于国兰，都是地生兰，国兰杂交后代基本经过根状茎阶段，因此不适用于上述方法。