[发明专利]一种鱼用DNA疫苗及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种鱼用DNA疫苗及其制备方法与应用，属于生物医药技术领域。所述的鱼用DNA疫苗为含有Z‑DNA序列的重组质粒与含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒的混合物；其中所述的含有Z‑DNA序列的重组质粒与所述的含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒之间的质量比为1：1；所述的含有Z‑DNA序列的重组质粒的序列如SEQ ID NO.1所示；所述的含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明制备的DNA疫苗能显著激活鱼体先天免疫反应，对GCRV病毒引起的鱼体死亡具有良好的保护效果，免疫保护率达60.2%，为后期DNA疫苗的应用及产业化提供理论基础和科学依据。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说，涉及一种鱼用DNA疫苗及其制备方法与应用。

背景技术

我国是淡水经济鱼养殖大国。集约化、高密度养殖模式容易导致鱼病爆发。疾病的暴发，往往会导致一些药品的过量使用。这种行为一方面可能造成鱼体产生严重耐药性、药物残留，造成食用者的二次污染，而且也会对生态环境造成严重影响。因此疫苗是解决疫病，尤其是病毒性疾病的优选方法。目前常用的鱼用疫苗主要有传统疫苗和DNA疫苗。DNA疫苗因其具有生产成本低、生化性能稳定、用量少、安全性能好等优点而成为研究热点。

目前常用的鱼用核酸疫苗通常都是选择单一病原体的某个基因作为免疫原，因此这种核酸疫苗仅能适用于预防单一病原体感染，而且有些病原体尤其是病毒，经常发生变异，使得疫苗的免疫效果下降。另一方面，注射核酸疫苗进鱼体内可能会引起自身免疫、过敏反应和炎症反应等，对鱼本身造成伤害。

因此迫切需要开发一种广谱、低毒性的，同时又不会使鱼体产生自身免疫反应的DNA疫苗。

发明内容

、要解决的问题

针对上述检测技术存在的问题，本发明提供一种鱼用DNA疫苗及其制备方法与应用，克服现有DNA疫苗的缺点与不足，得到一种鱼类广谱、低毒的DNA疫苗。

、技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种鱼用DNA疫苗，所述的鱼用DNA疫苗为含有Z-DNA序列的重组质粒与含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒的混合物；其中所述的含有Z-DNA序列的重组质粒与所述的含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒之间的质量比为1：1；

所述的含有Z-DNA序列的重组质粒的序列如SEQ ID NO.1所示；

所述的含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒的序列如SEQ ID NO.2所示。

上述所述的鱼用DNA疫苗中，

所述的Z-DNA序列通过人工合成来获取；

所述的PKZ开放阅读框序列通过PCR扩增来获取。

上述所述的鱼用DNA疫苗中，

所述的含有Z-DNA序列的重组质粒通过将Z-DNA序列插入到真核表达载体上来获取；

所述的含有PKZ开放阅读框序列的重组质粒通过将PKZ开放阅读框序列插入到真核表达载体上来获取；

所述的真核表达载体为含有Flag标签的真核表达载体。

上述所述的鱼用DNA疫苗中，

所述的含有Flag标签的真核表达载体为pCMV-Flag。

一种鱼用DNA疫苗的制备方法，包括以下步骤：