[发明专利]一种集诊疗于一体的多功能纳米药物载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种集诊疗于一体的多功能纳米药物载体，其特征在于：所述的多功能纳米药物载体由如下结构组成：八面体形三维DNA折纸框架、在框架边bundle上往外伸出的连接链连接的microRNA检测器、在bundle上往内伸出的连接链连接的基因治疗药物Bcl2 siRNA和嵌入bundle内的化学治疗药物阿霉素Dox；其中microRNA检测器是由修饰Cy5荧光基团和BHQ2猝灭基团的两条DNA链杂交而成，siRNA由sense链和antisense链两条RNA链杂交而成。

2.权利要求1所述的集诊疗于一体的多功能纳米药物载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)八面体形DNA折纸合成：将M13mp18 scaffold DNA长链和120根DNA staple链混合在Tris-乙酸缓冲液1×TAE、12.5mM醋酸镁MgAc₂溶液中，将混合液放进pcr仪，在一天内从95℃缓慢冷却到20℃，合成八面体形三维DNA折纸，浓度为10nM；

(2)八面体DNA折纸提纯：将500μl八面体折纸加到100kDa超滤管中，于离心机中离心，离心转速为3000rcf，离心时间为8min，离心结束后重复2-4次洗涤操作，即加入1×TAE、12.5mM MgAc₂溶液补到初始体积，进行离心，目的是去除过量的staple并将八面体DNA折纸浓缩至20nM；

(3)分散超滤后的八面体：为使八面体分散得更均匀、避免后续出现团聚现象，将超滤后的八面体置于金属混匀仪上以900-1000rpm、26℃条件震荡过夜；

(4)siRNA、检测器负载：siRNA由sense链和antisense链两条单链组成，检测器包括BHQ链和Cy5链两条单链，将超滤后的20nM的八面体折纸和sense链、antisense链、BHQ链、Cy5链混合，于pcr仪中以2.4℃/h的速度从50℃匀速降温至20℃；

(5)阿霉素Dox负载：负载了siRNA、检测器的八面体形折纸和阿霉素Dox按物质的量比1:10000比例混合，并置于金属混匀仪上以500rpm、25℃条件反应过夜。

3.根据权利要求1所述的集诊疗于一体的多功能纳米药物载体的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的scaffold DNA长链：staple链为1:10。

4.根据权利要求2所述的集诊疗于一体的多功能纳米药物载体的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的八面体折纸和sense链、antisense链、BHQ链、Cy5链按物质的量比1:1:1:1:1。

5.权利要求1所述的集诊疗于一体的多功能纳米药物载体在药物中的应用。