[发明专利]一种从蟾蜍毒素中制备蟾蜍二烯内酯的方法及其用途

权利要求书

1.一种从蟾蜍毒素中制备总蟾蜍二烯内酯的方法，其特征在于按下列步骤进行：

a、采用刮浆法获得蟾蜍毒素：将蟾蜍清洗干净后晾干身体表面的水分，抓住蟾蜍的后腹部，用拇指按压其背部，其余四指轻轻压住腹部，使耳后腺充满白色浆液后，然后用金属夹刮取蟾蜍头部两侧耳根附近的大疣粒和背部的大小疣粒得到毒液，将毒液刮下来后装入非铁的容器中，得到蟾蜍毒素，冷冻保存；

b、将步骤a得到的蟾蜍毒素先利用超临界流体萃取脂肪酸成分，萃取温度4-20℃，萃取压力25-45MPa，萃取时间1-3h，CO₂流量20-80m L/min，脱脂之后的毒素再用pH6.5-7.5，浓度0.02-1M的磷酸盐缓冲溶液温度14-20℃，搅拌提取蛋白1-3次，离心，然后将沉淀物用浓度为70-95％乙醇溶剂提取，减压浓缩回收溶剂，得到总蟾蜍二烯内酯部位浸膏；

c、将步骤b得到的总蟾蜍二烯内酯部位浸膏进行定性分析，将总蟾蜍二烯内酯部位部位浸膏用甲醇-水溶解，经高效液相色谱法进行分离，洗脱剂为体积比10:90—90:10的乙腈-水，采用等度或梯度洗脱，采取高效液相色谱分析法检测分析，经核磁和高分辨质谱技术鉴定得到9个蟾蜍毒素中的蟾蜍二烯内酯类化合物，其结构式为：

其中：

化合物D-1名称为：去乙酰蟾蜍它灵；

化合物D-2名称为：蟾毒灵3-O-β-D-葡萄糖苷；

化合物D-3名称为：(3β,5β,10β,14β)-3,5,10,14-tetrahydroxy-19-norbufa-20,22-dienolide-3-(14-hydroxytetradecanoic acid)ester；

化合物D-4名称为：沙蟾毒精；

化合物D-5名称为：蟾蜍它里定；

化合物D-6名称为Telocinobufagenin；

化合物D-7名称为Marinobufagenin；

化合物D-8名称为：蟾毒灵；

化合物D-9名称为：酯蟾毒配基。

2.根据权利要求1所述方法获得的浸膏蟾蜍二烯内酯部位和9个蟾蜍二烯内酯单体化合物在制备抗炎药物中的用途。

3.根据权利要求1所述方法获得的浸膏蟾蜍二烯内酯部位和9个蟾蜍二烯内酯单体化合物在制备抗肿瘤人乳腺癌细胞MCF-7、结肠癌细胞HT29和人宫颈癌细胞Hela的药物中的用途。