[发明专利]一种ApoB抗原特异性间充质干细胞的制备方法及其产品和应用

权利要求书

1.一种ApoB抗原特异性间充质干细胞的制备方法，其特征在于，至少包括以下步骤：

S1、获得脐带华通胶间充质干细胞；

S2、将γ-干扰素和脐带华通胶间充质干细胞共培养，刺激脐带华通胶间充质干细胞诱导表达MHC-Ⅱ类分子，获得表达MHC-Ⅱ类分子的抗原提呈细胞；

S3、将步骤S2获得的细胞与ApoB p18多肽共培养，产生ApoB抗原特异性间充质干细胞，

所述ApoB p18多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在S2中，γ-干扰素的终浓度为50～200ng/mL，优选为200ng/mL；

优选的，γ-干扰素共培养的时间为24～48小时，优选为48小时。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

在S2中，将培养得到的细胞重悬，离心，将细胞沉淀用培养基稀释至密度为0.8～1×10⁵个/mL，接种到新的细胞培养瓶中，将γ-干扰素加到细胞培养瓶中进行共培养；

优选的，步骤S2中的培养温度为36.5～37.5℃。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

在S3中，ApoB p18多肽的浓度为0.2～40μg/mL，优选为40μg/mL；

进一步优选的，所述培养的温度为36.5～37.5℃，培养的时间为24小时，培养的环境中含有体积百分比浓度为4～6％的CO₂。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在S3中，培养结束后用酶消化细胞、清洗、离心获得细胞；

优选的，酶采用质量百分比为0.2％～0.25％胰蛋白酶；

更优选的，清洗采用PBS溶液，

进一步优选的，离心的条件为800～900g离心力离心4～6min。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括将所述ApoB抗原特异性间充质干细胞进行免疫加强处理的步骤；

优选的，所述免疫加强处理包括低氧及SDF-1培养，使细胞高表达CXCR4。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，

所述低氧及SDF-1培养的条件为：将经过步骤S3共培养后生长良好的细胞放置到氧气体积百分比浓度为4～6％的低氧培养箱中培养8～15h；SDF-1的浓度为10～100ng/mL，优选为100ng/mL。

8.一种采用如权利要求1～7任一项所述的方法制备得到的ApoB抗原特异性间充质干细胞。

9.如权利要求8所述的ApoB抗原特异性间充质干细胞在制备用于治疗动脉粥样硬化的药物中的应用。

10.一种含有如权利要求8所述的ApoB抗原特异性间充质干细胞的制剂，其特征在于，所述制剂为注射液，注射液中还含有人血白蛋白和生理盐水；

优选的，所述注射液中人血白蛋白浓度为0.2～0.25％，ApoB抗原特异性间充质干细胞的浓度为0.75～1.25×10⁷个/mL；

更优选的，所述注射液的包装单位为1～3mL。