[发明专利]一种ApoB抗原特异性间充质干细胞的制备方法及其产品和应用

说明书

本发明涉及生物医用材料领域，具体讲，涉及一种ApoB抗原特异性间充质干细胞的制备方法及其产品和应用。ApoB抗原是动脉粥样硬化核心抗原，ApoB抗原特异性间充质干细胞的制备方法为：获得脐带华通胶间充质干细胞；将γ‑干扰素和脐带华通胶间充质干细胞共培养，刺激脐带华通胶间充质干细胞诱导表达MHC‑Ⅱ类分子；将步骤S2获得的细胞与ApoB p18多肽共培养，产生ApoB抗原特异性间充质干细胞。本发明创建了抗原特异性WJMSCs，精准靶点抑制动脉粥样硬化(AS)免疫微环境中致病免疫细胞，从病因学上首次达到针对AS特异病理机制靶点干预之目标。

技术领域

本发明涉及生物医用材料领域，具体讲，涉及一种ApoB抗原特异性间充质干细胞的制备方法及其产品和应用。

背景技术

动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)导致的缺血性心血管病、脑血管病、周围血管病是世界上致死致残第一位原因。近年一个里程碑式突破是争议100年的AS病因的学说终于揭晓。AS是多种炎症因子、细胞因子、免疫细胞网络交叉作用于血管壁形成的慢性免疫炎症。Canakinumab抗炎性血栓形成结果研究(Canakinumab Anti-inflammatoryThrombosis Outcome Study，CANTOS)首次证实应用白细胞介素-Ⅰβ(IL-1β)受体拮抗剂-卡那单抗治疗的冠状动脉粥样硬化患者(N Engl J Med 2017)，结果显示卡那单抗独立于降脂以外，可显著降低心血管事件，第一次以临床结果证实了AS的病因是血管壁免疫介导的慢性炎症。

然而，遗憾的是卡那单抗的副作用全身性非特异性免疫抑制导致了致死性感染，限制了临床应用。其它的免疫抑制剂如秋水仙碱、氯奎、氨甲喋呤等均因副作用无法应用于临床治疗AS。CANTOS研究证明，寄于厚望的他汀类降脂药也不能干预斑块免疫炎症链条。因此，迄今为止，国际上还没有针对AS免疫炎性病因学有效、且副作用小的治疗手段。

近年来，细胞生物学研究表明，来源于中胚层具有自我更新、多向分化潜能的间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)有独特的免疫调节功能。已证明不同来源的MSCs对参与冠状动脉粥样斑块炎症反应的固有免疫与获得性免疫过程中的单核/巨噬细胞、NK、DC、T、B淋巴细胞等均具有调控作用。间充质干细胞(MSCs)通过细胞接触表面分子以通讯联络调控免疫功能，如MSCs的表面分子PD-L1、Gal-9、CD200等与免疫细胞表面受体作用，传导抑制性的信号，抑制CD4+CD8+T细胞的增生，使粥样斑块上ApoB+CD4 T细胞大量凋亡，限制了免疫炎症，恢复了免疫平衡。MSCs通过旁/自分泌，释放有大量胞外囊泡及生物因子、免疫调节因子，如：IDO、PGE2、TGF-β、IL-10、TSG-6、HGF等以发挥抗炎症及免疫调节效应。在Apoe-/-高胆固醇小鼠AS模型中，MSCs可有效限制并逆转AS的粥样斑块。

同时，MSCs分泌大量蛋白分子抑制金属蛋白酶活性(MMP)，稳定细胞外基质成分。减少炎症细胞数量，直接补充及极化抗炎症的M2巨噬细胞，使之抗炎症细胞比值增加，逆转易损斑块，抑制组织金属蛋白活性，降低细胞基质降解，稳定纤维帽，防上斑块破裂及血栓形成等生物学效应。

大量临床硏究也证实，MSCs的免疫调节效应已有效的治疗了移植抗宿主病及多种自家免疫性病，如克隆氏病、红斑狼疮、类风湿性关节炎等。

然而MSCs的这种免疫调控作用是非特异性的，在它对AS炎症斑块免疫调控的同时，对全身多系统组织均有非特异免疫功能影响，这不仅造成了MSCs非精准靶点免疫干预导致的效果差，而更重要的是全身多系统免疫抑制造成不良副作用如各种病毒、细菌感染的机率增加。