[发明专利]一种ENO2单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种ENO2单克隆抗体及其制备方法和应用，涉及单克隆抗体技术领域。本发明提供了所述单克隆抗体11D7的重链和轻链的可变区的互补决定区序列，基于所述序列可将可变区序列构建到抗体表达载体上，转染细胞表达获得重组单克隆抗体。本发明得到的单克隆抗体载体易于保存，易于抗体生产过程质量控制；也方便对抗体做一系列的改造，更深入的研究，更广泛的应用。

技术领域

本发明属于单克隆抗体技术领域，具体涉及一种ENO2单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

烯醇化酶是生物体内糖酵解过程中的关键酶，在脊椎动物中，烯醇化酶(enolase)存在3种同功酶:α、β和γ。α-enolase(ENO1)又称为非神经元烯醇化酶(non-neuralenolase,NNE)，在许多组织均存在；β-enolase(ENO3)又称为肌肉特异性烯醇化酶(muscle-specificenolase,MSE)、骨胳肌enolase(skeletalmuscleenolase)，几乎仅见于肌肉组织；γ-enolase(ENO2)又称为神经元烯醇化酶(neuraleno-lase)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificeno-lase,NSE)，主要存在于神经元和神经内分泌组织。Enolase的活性形式均为二聚体，即由两个亚基组成，目前已知有5种形式的组合：αα、ββ、γγ、αβ和αγ。

烯醇化酶2(ENO2)又称NSE，NSE主要存在于神经元和神经内分泌细胞的胞质。神经元特异性烯醇化酶是一种普遍存在于生物体细胞质中能敏感反映神经元损伤的神经系统特异糖酵解酶。

NSE最早是作为小细胞肺癌的肿瘤标记物，但近年来越来越多的研究结果表明NSE可作为各类神经元损伤的特异性标志。在脑血管病，尤其在脑出血方面，越来越受到人们的重视。测定NSE在脑出血的诊断、判断疾病严重程度、估计预后和指导治疗等方面具有重要意义。

在脑损伤性疾病中，神经细胞中的NSE透过血脑屏障释放入脑脊液及血液中，引起血清及脑脊液中NSE水平升高，不同程度及不同性质的脑损伤NSE释放的量及速度亦不相同，且在广泛的脑损伤和越来越严重的继发性脑损伤患者中NSE持续升高，因此，其水平不仅能反映原发性脑损伤的程度，而且能反映继发性脑损伤的进展。检测血清NSE水平可为颅脑损伤和脑出血等脑血管性疾病诊断及预后判断提供一种新的手段。NSE作为神经重症监护的长期预后生物标志物和治疗指标具有极好的潜力。

但是目前关于NSE的检测，传统的产单克隆抗体的杂交瘤细胞不易保存，时间过长会出现细胞状态变差，甚至难以复苏，产生抗体量降低，并且抗体的序列未知，无法对抗体做更深入的研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种ENO2单克隆抗体及其制备方法和应用，特所述单克隆抗体异性好、效价高，并且基于得到所述单克隆抗体构建得到的表达载体和重组细胞，易于保存和改造。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种ENO2单克隆抗体11D7，所述单克隆抗体11D7包括重链和轻链；

所述轻链的可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ IDNO.3所示；

所述重链的可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列如SEQ ID NO.4～SEQ IDNO.6所示。

优选的，所述单克隆抗体11D7的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

优选的，编码所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。