[发明专利]一种小鼠脂肪干细胞外泌体制备方法在审
| 申请号： | 202210012543.X | 申请日： | 2022-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN114317426A | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 黄欣;李燕巧 | 申请（专利权）人： | 上海市同济医院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 周春洪 |
| 地址： | 200065 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 小鼠 脂肪 干细胞 体制 方法 | ||
1.一种小鼠脂肪干细胞外泌体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)取对数生长的第3至6代的小鼠脂肪干细胞，用10％FBSDMEM培养液培养，直到细胞密度达到70％-80％，吸走原培养液，用PBS清洗，换用含10％无外泌体FBS的DMEM培养液继续在37℃、5％CO2培养箱中培养45-50小时，收集上清培养液；
(b)3000g×15min离心上清培养液以除去细胞和细胞碎片，将上清液转移至100kDa分子量的超滤管中再次1500-2500g离心30min，收集浓缩液；
(c)将外泌体提取试剂加入到浓缩液中，轻轻颠倒混匀，放置4℃下至少12h；
(d)将混合物离心，4℃，1500g×30min，小心弃上清，加入PBS继续离心1500g×5min，吸去残余液体，即得所述小鼠脂肪干细胞外泌体。
2.根据权利要求1所述的小鼠脂肪干细胞外泌体制备方法，其特征在于，所述小鼠脂肪干细胞分离自5-10天龄C57BL/6小鼠。
3.根据权利要求1所述的小鼠脂肪干细胞外泌体制备方法，其特征在于，步骤(a)中，换用含10％无外泌体FBS的DMEM培养液后继续培养48小时，开始收集上清培养液。
4.根据权利要求1所述的小鼠脂肪干细胞外泌体制备方法，其特征在于，步骤(a)中吸走原培养液后用PBS清洗1-3次。
5.一种小鼠脂肪干细胞外泌体，其特征在于，所述小鼠脂肪干细胞外泌体是按照以下方法制备得到的：
(a)取对数生长的第3至6代的小鼠脂肪干细胞，用10％FBSDMEM培养液培养，直到细胞密度达到70％-80％，吸走原培养液，用PBS清洗，换用含10％无外泌体FBS的DMEM培养液继续在37℃、5％CO2培养箱中培养45-50小时，收集上清培养液；
(b)3000g×15min离心上清培养液以除去细胞和细胞碎片，将上清液转移至100kDa分子量的超滤管中再次1500-2500g离心30min，收集浓缩液；
(c)将外泌体提取试剂加入到浓缩液中，轻轻颠倒混匀，放置4℃下至少12h；
(d)将混合物离心，4℃，1500g×30min，小心弃上清，加入PBS继续离心1500g×5min，吸去残余液体，即得所述小鼠脂肪干细胞外泌体。
6.根据权利要求5所述的小鼠脂肪干细胞外泌体，其特征在于，所述小鼠脂肪干细胞分离自5-10天龄C57BL/6小鼠。
7.根据权利要求5所述的小鼠脂肪干细胞外泌体，其特征在于，步骤(a)中，换用含10％无外泌体FBS的DMEM培养液后继续培养48小时，开始收集上清培养液。
8.根据权利要求5所述的小鼠脂肪干细胞外泌体，其特征在于，步骤(a)中吸走原培养液后用PBS清洗1-3次。
9.权利要求4-8任一所述的小鼠脂肪干细胞外泌体在制备防脱发或护发的化妆品中的应用。
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