[发明专利]一种鉴别勃氏牡丹的引物、试剂、鉴别方法及试剂盒有效
| 申请号： | 202210014166.3 | 申请日： | 2022-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN114231603B | 公开（公告）日： | 2023-06-20 |
| 发明（设计）人： | 李井干;吴晶;刘晓宇;伏建国;余本渊;杨晓军 | 申请（专利权）人： | 南京海关动植物与食品检测中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京太兆天元知识产权代理有限责任公司 11108 | 代理人： | 张洪年 |
| 地址： | 210019 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 牡丹 引物 试剂 鉴别方法 试剂盒 | ||
1.一种鉴别勃氏牡丹的试剂，其特征在于：包括鉴别勃氏牡丹的引物和荧光探针，所述鉴别勃氏牡丹的引物包括上游引物和下游引物，上游引物为5′- CTGGATTTCTCTTGAGCTGTGA-3′（SEQ ID NO：1），下游引物为5′- GGAAGGAAATAGAATGTGGGTT -3′（SEQ ID NO：2）；所述荧光探针的序列为5′TGTATCCTATTAGGCTATTACCTGACACC -3′（SEQ ID NO：3）。
2.根据权利要求1所述的鉴别勃氏牡丹的试剂，其特征在于：探针5′端标记荧光报告基团FAM，3′端标记不发荧光的淬灭基团BHQ1。
3.鉴别勃氏牡丹的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：提取样品植物DNA；
S2：以权利要求1或2所述的上游引物、下游引物及探针形成的PCR反应体系对S1中提取的样品植物DNA进行扩增反应；
S3：如果有典型的扩增曲线，表明该待测的样品植物为勃氏牡丹；如果没有典型的扩增曲线，说明该待测的样品植物不为勃氏牡丹。
4.根据权利要求3所述的鉴别勃氏牡丹的方法，其特征在于： S2中的退火温度为60℃。
5.根据权利要求3或4所述的鉴别勃氏牡丹的方法，其特征在于：S2中PCR反应参数为94℃，15s；60℃，1min；40个循环。
6.鉴别勃氏牡丹的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括上游引物5′-CTGGATTTCTCTTGAGCTGTGA -3′（SEQ ID NO：1），下游引物5′- GGAAGGAAATAGAATGTGGGTT -3′（SEQ ID NO：2），荧光探针5′-FAM- TGTATCCTATTAGGCTATTACCTGACACC -BHQ1-3′。
7.根据权利要求6所述的鉴别勃氏牡丹的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的反应体系为浓度为10 mol/L的上游引物0.8μL；浓度为10 mol/L的下游引物0.8μL；浓度为10 mol/L的探针0.4μL；ROX0.4μL；DNA模板2.0μL；余量为水，总体积20.0μL。
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