[发明专利]富含半胱氨酸毒蛋白、表达载体及其在抑制植物病毒侵染中的应用

权利要求书

1.一种富含半胱氨酸毒蛋白，其特征在于，所述富含半胱氨酸毒蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种编码权利要求1所述富含半胱氨酸毒蛋白的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种权利要求1所述富含半胱氨酸毒蛋白的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为将权利要求2所述的核酸分子插入表达载体的多克隆位点获得；所述表达载体包括原核表达载体、真核表达载体和病毒表达载体中的一种。

4.根据权利要求3所述的富含半胱氨酸毒蛋白的重组表达载体，其特征在于，所述的表达载体中所述核酸分子的上游还包含编码标签序列，所述标签序列包含His标签、HA标签、GFP标签和Flag标签中的一种。

5.一种富含半胱氨酸毒蛋白的表达载体的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

获得富含半胱氨酸毒蛋白的目的基因片段；

将所述目的基因片段采用SEQ ID NO：3-4所示的引物进行PCR，获得PCR产物；

将载体pFu46-RFP经过XhoI/KpnI双酶切后与将所述PCR产物酶连，获得植物表达载体p35S::CRVP::RFP。

6.一种表达权利要求1所述富含半胱氨酸毒蛋白的转基因植物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

获得富含半胱氨酸毒蛋白的表达载体；

将所述富含半胱氨酸毒蛋白的表达载体转化到根瘤农杆菌EHA105中，获得农杆菌转化子；

将所述农杆菌转化子侵染烟草叶片，获得T 0代转基因植物。

7.权利要求1所述的富含半胱氨酸毒蛋白和/或权利要求2所述的核酸分子和/或权利要求3-4任一所述的重组表达载体在抑制植物病毒侵染中的应用，其特征在于，所述植物病毒包括烟草普通花叶病毒、烟草黄瓜花叶病毒和马铃薯Y病毒中的至少一种。

8.一种抑制植物病毒侵染方法，其特征在于，所述方法包括：将权利要求3-4任一所述的重组表达载体借助于基因工程手段介导植物遗传转化，获得能够抑制植物病毒侵染的转基因植物，所述植物病毒包括烟草普通花叶病毒、烟草黄瓜花叶病毒和马铃薯Y病毒中的

至少一种。