[发明专利]富含半胱氨酸毒蛋白、表达载体及其在抑制植物病毒侵染中的应用

说明书

本发明提供了一种富含半胱氨酸毒蛋白及其在抑制植物病毒侵染中的应用，所述富含半胱氨酸毒蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明通过VIGS技术沉默NbCRVP，从RNA、蛋白和PVY‑GFP荧光强度均说明沉默NbCRVP上调了本氏烟对TMV、PVY或CMV的敏感性、促进病毒的侵染。过表达NbCRVP抑制了TMV、PVY、CMV侵染或三种病毒混合侵染。这均说明NbCRVP作为一种新的潜在抗病基因，可以抵抗病毒的侵染。该蛋白能够抑制植物病毒的侵染，是烟草上一种潜在的抗病毒基因，NbCRVP可作为潜在的抗病毒蛋白应用，进一步丰富了抗病毒基因范畴。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及富含半胱氨酸毒蛋白、表达载体及其在抑制植物病毒侵染中的应用。

背景技术

烟草病毒性病害是世界各烟区的主要病害之一，每年都要造成巨大的经济损失。我国的烟草病毒病害在建国初期己有文献记载，进入20世纪70年代以后，病毒病的危害逐年加重。1989-1991年进行的国家烟草专卖局资助科研项目“全国烟草侵染性病害调查研究”，查明引起我国烟草病毒病的病毒共有16种，其中分布广泛、危害严重的有4种：包括烟草普通花叶病毒(TMV)、烟草黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草蚀纹病毒(TEV)、马铃薯Y病毒(PVY)，其次还有烟草环斑病毒(TRsv)、马铃薯X病毒(PVX)、烟草坏死病毒(TNv)、烟草线条病毒(TSV)等。20世纪60年代以前我国各大烟区受TMV危害最严重，后来黄瓜花叶病毒、马铃薯Y病毒与烟草普通花叶病毒两两之间或者三者复合侵染为害着烟草的生产。TMV在烟株生长过程中从苗期到大田整个生长发育期均可发生，主要造成烟叶的叶片厚薄不匀乃至畸形、皱缩且呈现黄绿斑驳，严重时可使花器变形，果实小而皱缩，种子不能发芽，还会使烤烟的色泽，吃味，品质不同程度的下降。据估计，由于病毒病的危害，全世界每年仅由烟草花叶病毒病一项危害就造成约1亿多美元的经济损失。PVY作为马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的代表种，是一种典型的侵染植物的RNA病毒。PVY主要侵染茄科作物，并造成很大的产量损失，该病毒以非持久方式通过带毒蚜虫传播。PVY存在于世界各地的烟草种植区，PVY引起的病毒病也是我国烟草生产上危害最为严重的病害之一，广泛分布于我国22个植烟区。引起系统性脉带状症状的PVY分离株显著降低烟草产量，而引起系统性脉坏死(PVY^N)的分离株则导致烟草种植中最大的产量损失。CMV是已知分布范围最广、危害性最大的植物病毒之一，主要通过蚜虫和汁液摩擦传播；及时防治传毒介体蚜虫，切断传播途径，能减轻为害。我国大部分地区的辣椒、番茄、烟草、黄瓜、菜豆、豇豆、萝卜和大白菜上均有CMV发生。烟草苗期和成株期均可感染，但以大田成株期发病较多。烟草病毒病一旦发生很少有化学方法及时控制，对于病毒病的防治，应该加强病虫害的预测预报，及时掌握病毒病发生的动态，可以有针对性的采取防治措施。一般采用预防为主，综合防治结合的策略。

半个多世纪以来，化学农药在农业生产中一直占据非常重要的地位，然而化学农药的不合理使用及其高毒、高残留的特性不仅对人畜的安全造成极大的威胁，还严重破坏了生态平衡。随着病虫害的抗药性逐年加强，农药的使用量和使用频率也相应加大，同时又对环境的污染和非靶标生物的杀伤力造成更严重的恶性循环。而生物农药具有低毒、繁殖快、不伤害天敌且防治对象不易产生抗药性，被称为“无公害农药”。生物农药虽然具有许多化学农药难以具备的优点，但生物农药产品与化学农药相比，也存在许多本身固有的弱点，比如起效慢、易受温湿度等条件影响、作用成分复杂等。

因此，如何筛选出抗病基因，对于植物病毒的防治具有重要意义。

发明内容

本发明目的是提供一种富含半胱氨酸毒蛋白及其在抑制植物病毒侵染中的应用，所述抗植物病毒的富含半胱氨酸毒蛋白，用于植物病毒病的生物防治，为植物病毒病的防治提供了新的抗病基因范畴。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

在本发明的第一方面，提供了一种富含半胱氨酸毒蛋白，所述富含半胱氨酸毒蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。