[发明专利]一种利用甘露糖合成2′-岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌及其应用在审
| 申请号： | 202210018189.1 | 申请日： | 2022-01-07 |
| 公开（公告）号： | CN114276971A | 公开（公告）日： | 2022-04-05 |
| 发明（设计）人： | 李庆刚;李玉;李浩正;郑艳玲;宗剑飞;肖卫华;彭则涛;程亚楠;李畅;路福平 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学;山东合成远景生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/56;C12N15/60;C12N15/61;C12N15/31;C12P19/24;C12P19/18;C12P19/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 栗华楠 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 甘露 合成 岩藻糖基 乳糖 重组 大肠杆菌 及其 应用 | ||
1.一种以甘露糖为碳源生产2′-岩藻糖基乳糖的基因工程菌，其特征在于，是以大肠杆菌为出发菌株，在基因组上敲除磷酸甘露糖异构酶编码基因manA所得。
2.如权利要求1所述的生产2′-岩藻糖基乳糖的基因工程菌，其特征在于，所述工程菌以大肠杆菌为出发菌株，敲除lacI、lacZ基因，并且过表达wcaG、gmd、lacy基因，之后在基因组上敲除磷酸甘露糖异构酶编码基因manA，过表达磷酸甘露糖变位酶编码基因manB、α-(1,2)-岩藻糖基转移酶基因futC、甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶编码基因manC所得。
3.如权利要求1所述的一株生产2′-岩藻糖基乳糖的基因工程菌，其特征在于，使用Ptrc启动子过表达wcaG、gmd、lacy基因。
4.如权利要求1所述的一株生产2′-岩藻糖基乳糖的基因工程菌，其特征在于，采用pSB4K5质粒表达futC、manC。
5.如权利要求1所述的一株生产2′-岩藻糖基乳糖的基因工程菌，其特征在于，采用pTrc99a质粒表达manb。
6.如权利要求1所述的一株生产2′-岩藻糖基乳糖的基因工程菌，其特征在于，还敲除UDP-葡萄糖脂质载体转移酶编码基因Wcaj。
7.如权利要求1所述的一株生产2′-岩藻糖基乳糖的基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌MG1655为出发菌株。
8.如权利要求1所述的一株生产2′-岩藻糖基乳糖的基因工程菌，其特征在于，
所述Plac启动子，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；
所述lacI基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示；
所述lacZ基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示；
所述Ptrc启动子，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:4所示；
所述wcaG基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:5所示；
所述gmd基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:6所示；
所述lacy基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:7所示；
所述manA基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:8所示；
所述manB基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:9所示；
所述futC基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:10所示；
所述manC基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:11所示；
所述Wcaj基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:12所示。
9.权利要求1-8任意一项所述工程菌在生产2′-岩藻糖基乳糖中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，发酵制备2′-岩藻糖基乳糖的方法如下：将工程菌种子液按2-10％接种量发酵培养基中，30-37℃，400-600rpm，培养36-52h；
发酵培养基组成如下：1.5-3.5g/L KH2PO4，1.5-3.5g/L NH4Cl，1.7-2.5g/L柠檬酸，1.4-2g/L MgSO4·7H2O，5-7g/L酵母粉，10-20mL/L微量元素溶液，1-10g/L甘露糖，10-15g/L甘油，5-10g/L乳糖，其余为水。
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