[发明专利]一种新型TTF-1启动子调控基因及其表达应用

说明书

本发明公开了一种新型TTF‑1启动子调控基因及其表达应用，属于基因技术领域。本发明利用分子克隆技术，在无启动子和增强子的真核载体基础上，分别构建TTF‑1启动子核心序列调控miR‑7真核表达载体，其中TTF‑1启动子的序列长度分别为1612bp、1212bp和853bp。通过体外实验筛选得到调控效果最优的TTF‑1启动子核心序列调控真核表达载体。接下来利用TRANSFAC和JASPAP数据库筛选出结合到TTF‑1启动子核心序列的转录因子，根据预测结果利用定点突变技术对TTF‑1核心序列进行改造，通过体外实验与对照组对比，改造后的新型TTF‑1启动子对miR‑7表达水平显著升高，对人肺癌95D细胞体外生长抑制作用明显。可用于肺癌肿瘤基因治疗的药物研制。

技术领域

本发明涉及生物基因技术，具体为一种新型TTF-1启动子调控基因及其表达应用。

背景技术

癌症是恶性肿瘤引起的，恶性肿瘤具有细胞分化和增殖异常、生长失去控制、浸润性和转移性等生物学特征，癌症是目前医学上最为棘手和死亡率极高的疾病之一。

癌症主要治疗技术包含手术治疗、化学治疗、放射线治疗和基因治疗等。

肿瘤基因治疗是以改变人的遗传物质为基础的生物医学治疗，是指将具有正常功能的基因或有治疗作用的基因通过一定的方式导入靶细胞，直接针对肿瘤的根源而发挥治疗作用。

随着相关分子生物学技术的不断发展和完善，肿瘤基因治疗技术也得到了迅速的发展，但是在从基础研究过渡到临床试验阶段时，肿瘤基因治疗的靶向性问题仍然没有得到较好的解决。靶向性是指在基因治疗的过程中将治疗基因的作用高效地限定在特定的靶细胞、组织或器官内，而不影响其他正常的细胞、组织或器官的功能，这对于肿瘤的基因治疗是非常重要的，肿瘤基因治疗的靶向性问题直接关系到治疗的成败。

发明内容

本发明的目的在于克服上述背景技术困难，对调控外源治疗基因表达的组织特异性TTF-1启动子核心序列进行改造，使改造后的新型TTF-1启动子能更有效的靶向调控外源治疗基因的表达，提供一种新型TTF-1启动子调控基因及其表达应用。

为达到上述目的，采用的技术方案为：

一种新型TTF-1启动子调控基因，利用定点突变技术对长度为359bp的TTF-1核心序列进行改造得到，具体如下：

36986493bp-36986497bp序列由原TGGCT突变为TGGCA，

36986636bp-36986640bp序列由原TGGCC突变为TGGCA，命名为p-^opt1Tcor-miR-7。

或者：

36986493bp-36986497bp序列由原TGGCT突变为TGGCA，

36986563bp-36986567bp序列由原ATGCA突变为TGGCA，

36986610bp-36986614bp序列由原GGGCA突变为TGGCA，

36986636bp-36986640bp序列由原TGGCC突变为TGGCA，命名为p-^opt2Tcor-miR-7。

上述的新型TTF-1启动子调控基因的表达方法，其特征在于，包含以下步骤：

1）、扩增miR-7基因