[发明专利]一种具有免疫调节活性的鳕鱼肽及其应用

说明书

本发明公开了一种具有免疫调节活性的鳕鱼肽及其应用，属于生物医药领域。本发明以鳕鱼为原料，通过以下步骤：鳕鱼磨碎、酶解、喷雾干燥、分离制备、脱醇、脱盐、冷冻干燥，开发了一种醇溶性鳕鱼肽。本发明通过实验发现醇溶性鳕鱼肽在一定剂量下显示出促进RAW264.7细胞释放NO的能力；500μg/mL醇溶性鳕鱼肽处理细胞释放NO的量比空白组高出31.41％；且本发明以鳕鱼为原材料，安全性高。本发明采用鳕鱼为原料开发以生物活性肽为主的酶解物，原料丰富，来源广泛，制备工艺流程简便，可满足大规模工业化生产；其对于鳕鱼生物活性肽在功能性食品、保健食品或者药品中的开发利用具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及一种具有免疫调节活性的鳕鱼肽及其应用，属于生物医药领域。

背景技术

免疫力与机体健康息息相关，免疫稳态对人类健康非常重要。在正常生理条件下，免疫系统负责维持免疫稳态平衡。免疫系统失衡可导致免疫缺陷疾病、感染性疾病、超敏性疾病、自身免疫性疾病和恶性肿瘤。适应性免疫对潜在危险的外来抗原具有高度特异性，分为细胞介导免疫和抗体介导免疫两种类型。目前，用于治疗免疫缺陷疾病的药物，如左旋咪唑，有很多副作用，因此寻找一种无副作用的增强免疫力的产品非常重要。RAW264.7细胞是构成机体免疫系统中免疫细胞的重要成员之一，它在免疫防卫、免疫维稳和免疫监察中都有不可忽视的作用，是最先做出免疫应答的细胞种类之一。被激活的巨噬细胞具有吞噬能力，并通过分泌具有各种功能的免疫活性物质，在免疫应答中占据不可忽视的地位。小鼠脾淋巴细胞分离自脾脏组织；脾脏是机体最大的免疫器官，占全身淋巴组织总量的25％，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，是机体细胞免疫和体液免疫的中心。成熟淋巴细胞需依赖抗原刺激而分化增殖，继而发挥其免疫功能。

鳕鱼是当今世界产量最高的鱼种之一，主要生产于加拿大、冰岛、挪威、俄罗斯、日本、朝鲜等国。而在我国，鳕鱼的主要产地则分布于黄海北部、山东东南部以及东南沿海的相关地带。鳕鱼是一种深海鱼。其高蛋白、低脂肪的营养价值，在看重饮食质量的西方人眼中，被誉为“餐桌上的营养师”、“液体黄金”，是比黄金珍贵的宝藏。研究表明，鱼蛋白水解物具有多种生物活性，如抗氧化活性、抗高血压、抗糖尿病和抗菌活性。活性肽可通过酶解工艺从蛋白质序列中释放出来，发挥多种生物功能或生理效应。近年来，研究者从太子参蛋白、玉米醇溶蛋白、牛初乳乳清蛋白、厚壳贻贝蛋白等的水解物中发现了具有免疫调节活性的肽，但由于技术的限制以及工艺成本高等因素，限制了其进行工业化生产和利用。

因此，开发一种提取工艺简便，且具有潜在免疫调节活性的多肽对于增强免疫的保健食品和药品的开发具有重要意义。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的缺点，提供一种具有免疫调节活性的醇溶性鳕鱼肽的制备方法，以促进RAW264.7细胞释放NO含量、促进小鼠脾细胞增殖，增强免疫调节功能。

本发明提供了一种鳕鱼肽粉，所述鳕鱼肽粉是按照下述方法制备得到的：

S1、鳕鱼磨碎：将鳕鱼加水磨碎，得到鳕鱼混合液；

S2、酶解：将步骤S1得到的鳕鱼混合液加碱后调pH值至8.0～8.5，升温使温度达到55～58℃，按照0.19～0.21％比例加入碱性蛋白酶，搅拌均匀，酶解1.8～2.2h，再升温灭酶10～15min，冷却至65℃以下后，首先进行压滤，然后通过振动筛网离心、膜过滤分离，最后浓缩得到鳕鱼酶解液；

S3、喷雾干燥：将步骤S2得到的鳕鱼酶解液进行喷雾干燥，得到鳕鱼肽粉；

S4、分离制备：将步骤S3得到的鳕鱼肽粉按照质量比为(1：18)～(1：22)的比例加到质量分数为75～85％的乙醇中，20～30℃搅拌1～2h，在7500～8500g转速下离心20～30min，取上清液，得到醇溶性鳕鱼肽；

S5、脱醇：将步骤S4中所述的醇溶性鳕鱼肽用旋转蒸发仪除去乙醇至原体积的3～5％，得脱醇的醇溶性鳕鱼肽；