[发明专利]一种用于分子诊断的EGFR vIII重排的DNA标准品、RNA标准品及其应用在审
| 申请号： | 202210026401.9 | 申请日： | 2022-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN114381523A | 公开（公告）日： | 2022-04-22 |
| 发明（设计）人： | 蒋涛华;傅坚刚;邵悦 | 申请（专利权）人： | 仁宽（上海）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 周新楣 |
| 地址： | 200120 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 分子 诊断 egfr viii 重排 dna 标准 rna 及其 应用 | ||
1.一种用于分子诊断的EGFRvIII重排的DNA标准品，其特征在于，所述DNA标准品的核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示。
2.一种用于分子诊断的EGFRvIII重排的RNA标准品，其特征在于，所述RNA标准品的核苷酸序列如SEQ ID NO.42所示。
3.一种制备权利要求1所述DNA标准品或权利要求2所述RNA标准品的细胞，其特征在于，所述细胞的基因组重组有权利要求1所述的DNA标准品的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的细胞，其特征在于，所述细胞以人永生化细胞系为宿主细胞；
所述宿主细胞选自HEK293、HCT116、DLD-1、RKO和SW48中的一种。
5.权利要求3或4所述的制备DNA标准品或RNA标准品的细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将针对EGFR-E1基因的1号内含子的sgRNA构建到载体pX330上，得到质粒E1-2；
(2)将针对EGFR-E7基因的7号内含子的sgRNA构建到载体pX330上，得到质粒E7-3；
(3)将质粒E1-2和质粒E7-3共同转染宿主细胞，得重组细胞；
(4)对重组细胞进行单克隆化，得到制备DNA标准品或RNA标准品的细胞。
6.根据权利要求5所述的制备DNA标准品或RNA标准品的细胞的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述针对EGFR-E1基因的1号内含子的sgRNA的序列如SEQ ID NO.15所示。
7.根据权利要求6所述的制备DNA标准品或RNA标准品的细胞的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述针对EGFR-E7基因的7号内含子的sgRNA的序列如SEQ ID NO.26所示。
8.根据权利要求7所述的制备DNA标准品或RNA标准品的细胞的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述单克隆化采用有限稀释法进行。
9.权利要求1所述的EGFRvIII重排的DNA标准品或权利要求2所述的EGFRvIII重排的RNA标准品在制备检测EGFRvIII重排的试剂盒中的应用。
10.权利要求1所述的EGFRvIII重排的DNA标准品或权利要求2所述的EGFRvIII重排的RNA标准品在LDT或IVD研发体系的性能评价中的应用。
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