[发明专利]一种快速筛选八角莲中多靶标活性配体的方法

权利要求书

1.一种快速筛选八角莲中多靶标活性配体的方法，其特征是：

包括以下步骤：(1)配制酶促反应缓冲溶液；

(2)配制待测样品溶液；取适量八角莲总提物溶解于所述酶促反应缓冲液中得到待测样品溶液；

(3)待测样品与多靶酶亲和反应；分别取适量的待测样品溶液、DNA拓扑异构酶I、拓扑异构酶II、环氧合酶-2、血管紧张素转化酶2于离心管中，混合均匀后恒温孵育反应，反应结束后于超滤离心管中用酶促缓冲溶液多次洗脱，对洗脱截留配体采用有机溶剂洗脱，收集洗脱液得到实验组溶液；采用失活酶作为对照组，其余与实验组相同得到对照组溶液；

(4)采集出峰数据；取适量上述待测样品溶液、实验组溶液、对照组溶液冷冻干燥，后加入有机溶液溶解后仪器分析，采集出峰数据；

(5)计算富集率筛选出八角莲中的活性配体；通过上述出峰数据计算富集率，通过富集率得到DNA拓扑异构酶I、拓扑异构酶II、环氧合酶-2、血管紧张素转化酶2对八角莲筛选后的活性配体。

2.根据权利要求1所述的一种快速筛选八角莲中多靶标活性配体的方法，其特征是：根据上述富集率得到的八角莲中多靶标活性配体为β-脱水鬼臼苦素、脱氧鬼臼毒素、槲皮素、山奈酚、鬼臼毒素。

3.根据权利要求1所述的一种快速筛选八角莲中多靶标活性配体的方法，其特征是：所述步骤(1)中，所述酶促反应缓冲液为0.1mol/L的磷酸钠溶液或0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐。

4.根据权利要求3所述的一种快速筛选八角莲中多靶标活性配体的方法，其特征是：所述步骤(1)中，取50mL的0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液与34.5mL的0.1mol/L盐酸混匀后，使用去离子水稀释至100mL，得到pH值为7.8的0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐酶促缓冲。

5.根据权利要求3所述的一种快速筛选八角莲中多靶标活性配体的方法，其特征是：所述步骤(1)中，分别取1mol/L磷酸氢二钠溶液和1mol/L磷酸二氢钠溶液46.3mL和53.7mL，使用去离子水溶解至总体积为1L，充分混合后得到pH值为6.8的0.1mol/L的磷酸钠酶促缓冲溶液。

6.根据权利要求1所述的一种快速筛选八角莲中多靶标活性配体的方法，其特征是：所述步骤(2)中，取适量八角莲总提物于酶促反应缓冲液充分溶解，得到浓度为8.0mg/mL八角莲待测样品溶液。

7.根据权利要求1所述的一种快速筛选八角莲中多靶标活性配体的方法，其特征是：所述步骤(3)中，分别取100μL待测样品溶液、10μL的2U或5U的DNA拓扑异构酶I、10μL的2U或4U的DNA拓扑异构酶II、10μL的2U或4U的环氧合酶-2、0.5μg的血管紧张素转化酶2于0.2mL的离心管中混合均匀，于37℃恒温培养箱中孵育40min，反应结束后转移至截留分子量为10KD的超滤离心管中，在10000rpm离心10min，加入200μL的酶促缓冲溶液重复洗脱离心，向离心管中截留的配体加入溶剂洗脱，收集洗脱液得到实验组溶液；对照组采用沸水中加热失活的DNA拓扑异构酶I、拓扑异构酶II、环氧合酶-2、血管紧张素转化酶2，其余与实验组相同。