[发明专利]一种载体系统和应用及通过其降解目的蛋白的方法有效
| 申请号： | 202210046808.8 | 申请日： | 2022-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN114058641B | 公开（公告）日： | 2022-04-01 |
| 发明（设计）人： | 叶颖;李京生;谢文燕;张文胜 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113;C12N15/55;C12N15/29;C12N15/62;C12N5/10 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 215000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 载体 系统 应用 通过 降解 目的 蛋白 方法 | ||
1.一种载体系统，其特征在于，所述载体系统中包括：含有目的基因sgRNA及Cas9的表达载体，含有目的基因和生长素诱导降解因子AID的融合表达载体，含有生长素受体蛋白—水稻F-box转运抑制性响应蛋白1
2.根据权利要求1所述的载体系统，其特征在于：所述含有目的基因sgRNA的表达载体包括pGL3载体或PX330载体，以及连接在所述pGL3载体或PX330载体上的靶向目的基因的sgRNA。
3.根据权利要求1所述的载体系统，其特征在于：所述含有目的基因和生长素诱导降解因子AID的融合表达载体包括pPB-CAG-IRES载体以及连接在所述pPB-CAG-IRES载体上的目的基因和编码生长素诱导降解因子AID的基因。
4.根据权利要求3所述的载体系统，其特征在于：所述目的基因和编码生长素诱导降解因子AID的基因通过柔性蛋白linker连接。
5.根据权利要求3所述的载体系统，其特征在于：所述编码生长素诱导降解因子AID的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。
6.根据权利要求1所述的载体系统，其特征在于：所述含有生长素受体蛋白—水稻F-box转运抑制性响应蛋白1
7.根据权利要求1所述的载体系统，其特征在于：所述含有转座酶的表达载体为PiggyBac Transposase转座酶载体709 pSPB-transposase。
8.权利要求1-7任一项所述的载体系统在降解目的蛋白中的应用，其特征在于：编码所述目的蛋白的基因为权利要求1所述的目的基因。
9.一种通过权利要求1-7任一项所述的载体系统降解目的蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述含有目的基因sgRNA及Cas9的表达载体，含有目的基因和生长素诱导降解因子AID的融合表达载体，含有生长素受体蛋白—水稻F-box转运抑制性响应蛋白1
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：用生长素处理所述稳定转染的细胞至少1h。
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