[发明专利]一种双峰驼的精液冷冻方法在审
| 申请号： | 202210048717.8 | 申请日： | 2022-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN114304138A | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 何牧仁;其其格;孟克巴依尔;朱莉仙;郭少平;聂慧;乌力吉;张智文 | 申请（专利权）人： | 阿拉善盟畜牧兽医技术推广中心（阿拉善盟动物疫病预防控制中心） |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 朱芳 |
| 地址： | 750300 内蒙古自治区阿拉善盟阿拉善左旗巴彦浩特镇新城区雅布赖*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 双峰驼 精液 冷冻 方法 | ||
1.一种双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，包括：
采集的精液与液化液按照1:1稀释，保存在37℃恒温箱中一段时间，期间不断用移液器轻轻抽取混合液使其充分液化；
取充分液化后的精液进行镜检，评定精子活力；
精子活力合格的精液离心处理，弃去上清液；
加冷冻液，与弃去上清液的精液充分混合；
将与冷冻液充分混合的精液分装在多个0.5mL的细管中，并封闭细管的端口；
把装有精液的细管放入避光容器中，缓慢降温至4℃，平衡一段时间；
平衡后的精液放入4℃的冷冻架上；
装有精液的细管置于液氮面上方熏蒸一段时间，然后将细管放入液氮液中冷冻。
2.根据权利要求1所述的双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，精液稀释前，将需与精液接触的器皿以及液化液放在37℃恒温箱中备用，将冷冻液置于室温备用。
3.根据权利要求1所述的双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，精液稀释前，将采集的精液进行镜检；镜检合格的精液与液化液按照1:1稀释，然后保存在37℃恒温箱中30min，期间不断用移液器轻轻抽取混合液使其充分液化；每隔5分钟，观察液化情况，待完全液化，用血细胞计观察精子浓度。
4.根据权利要求1所述的双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，评定精子活力时，取一滴充分液化的精液于载玻片上，加盖盖玻片后在38℃恒温装置的显微镜上评定活力。
5.根据权利要求1所述的双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，离心处理时，对精子活力合格的精液离心处理10min。
6.根据权利要求1所述的双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，所述液化液包括9.6mLTCF溶液和0.4mL蛋黄，其中，TCF包括36.34gTris、19.89g柠檬酸、5g果糖、2.92gEDTA、0.5gBSA、10万单位青霉素、10万单位链霉素和800mL超纯水。
7.根据权利要求1所述的双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，加冷冻液时，根据精液密度按比例加入冷冻液A，用移液器缓慢抽取混合液使精液充分与冷冻液A混合，置于4-5℃环境中平衡2h；然后加入冷冻液B，充分混匀，其中，冷冻液A和冷冻液B的比例为1:1。
8.根据权利要求7所述的双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，所述冷冻液A包括8mLTCF和2mL蛋黄，所述冷冻液B包括9mLTCF和1mL蛋黄；其中，TCF包括36.34gTris、19.89g柠檬酸、5g果糖、2.92gEDTA、0.5gBSA、10万单位青霉素、10万单位链霉素和800mL超纯水。
9.根据权利要求1所述的双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，装有精液的细管在避光容器中降至4℃平衡10-30min。
10.根据权利要求1所述的双峰驼的精液冷冻方法，其特征在于，装有精液的细管置于液氮面上方4cm处熏蒸15min。
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